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  • 發布時間:2019-04-28 18:05 原文鏈接: 姐妹染色單體分化染色方法

    姐妹染色單體差別染色可使中期染色體顯示深淺不同的兩條單體,能借以觀察姐妹染色單體互換(SCE)現象。SCE是兩條染色單體在DNA合成中核苷酸序列發生互換而表現出來一種現象。即是細胞分裂是DNA同源重組的結果。SCE既是一種無害的變化(有生理波動),也可受射線、致突和致癌物三因素等作用而升高。SCE一定成度反映細胞的損傷與修復狀態。
    1、原理:
      在細胞培養過程中,加入一定是的5-溴脫氧尿苷(BudR ),當細胞在DNA復制過程時,BudR能作為核苷酸的前體取代胸腺嘧啶而被摻入到新合DNA中。因此,當細胞處于第二個分裂周期時,同一染色體的兩條姐妹染色單體,一條由雙股都含有BudR的DNA鏈構成,而另一條為單股含有BudR的DNA鏈。在結構上雙股含BudR的DNA螺旋化程度較低,故對染色劑親合力低,在用Giemsa染色時其單體著色淺,只有單股含BudR的DNA鏈組成的單體則著色深而形成差別著色。
    2、BudR貯存液的配制:
      BudR 5mg(先用0.5ml 1N NaOH溶解)
      然后加蒸餾水至 5ml
      即成1000ug/ml的貯存液,因BudR遇光會發生分解,貯存液需置棕色瓶并黑紙封瓶避光冰凍保存。
    3、實驗材料:
      所檢培養細胞;
      BudR貯存液;
      2×SSC液;
      常規染色體制片所需物品;
      水浴鍋;
      20W紫外燈一個;
      培養皿;
      鏡頭紙;
    4、操作程序
      (1)BudR摻入:細胞培養24小時后于培養液中加入BudR,最終濃度5-15mg/ml,避光條件下繼續培養。
      (2)終止培養:待細胞經歷兩個細胞周期(48小時),培養終止前3小時加秋水仙素,秋水仙素終濃度為0.02ug/ml培養液;
      (3)常規制片及烤片;
      (4)紫外燈照射:取標本玻片置于大號培養皿內,正面朝上,上覆蓋鏡頭紙,從玻片外鏡頭紙邊沿加2×SSC液致使全鏡頭紙浸濕,移入50-60℃水浴鍋內,紫外線燈距離5cm,照射30-40分鐘;
      (5)染色:取出照射后標本,蒸餾水沖洗,置PH6.8的2%Giemsa染色15分鐘;
      (6)洗片及存片:同G帶片
      注意:BudR是一種強突變劑,使用濃度不宜過高,否則會產生細胞毒性作用。

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