良好的移液操作規范可以直接影響到實驗的成功和可重現性
1.選擇合適的量程,可提高1%的移液準確性
對特定的一支移液器,其移液的準確性隨移液量的降低而降低。因此在10%-100%量程范圍內可以操作,最佳量程范圍是35%-100%。不要用大量程的移液器移取小體積的液體,否則移液準確性將下降1%。
2.正確的量程設定,可提高0.5%移液準確性
當把大量程調為小量程(如從200ul調到100ul)時,直接調節到位即可;當把小量程調為大量程時,需先超過所需量程1/3到1/2圈,然后再回調到所需的量程。這樣做是為了消除移液器本身的機械誤差,提高0.5%的移液準確性。
3.潤洗吸頭,可提高0.5%的移液準確性
在正式移液前,先用吸頭吸取待轉移的液體,然后再把它作為廢液排掉。潤洗吸頭的目的是減少吸頭內壁吸附力對準確性的影響,可提高0.5%的移液準確性
4.正確的吸液速度,可提高5%的移液準確性
吸液速度:在吸液過程中,須慢慢降低拇指的下壓力,使液體在吸頭內均勻且緩慢的上升;對于大量程和高粘度移液,在吸液時松開拇指后,須使吸頭在液體內停留3-5秒后才能移出。不正確的吸液速度會導致至少5%的準確性下降!
5.正確的吸液角度,可提高0.5%的準確性
(微量程移液器可達2.5%)
在移液的過程中須一直保持移液器在豎直狀態,最大傾角不超過20°(一般有傾角會導致實際吸液量偏大)。
6.正確的吸液深度,可提高1%準確性
(微量程移液器可達5%)
在吸液過程中,如果吸頭浸沒過多,額外增大的壓力會使多余的液體被移液器吸入,并且過分浸入會導致外壁殘留液體增多從而造成移液量值偏高;如果吸頭浸沒高度不足,空氣將會隨液體吸入吸頭內,從而產生氣泡造成量值偏低;
7.良好的分液技巧,可提高1%的準確性
我們在分液的時候,可以將吸頭先接觸容器內壁,使其沿容器內壁向上滑動,避免液體粘在槍頭上。另外,液面上分液,液面分液和液面下分液三種方法同樣也適用于非粘性溶液。液面下分液主要用于小量程移液器的分液,注意一定要在吸頭從液體中移出后才能松開拇指。
8.在恒定溫度下移液,可提高5%的準確性
經過長時間的移液,您手上的溫度會使移液器變熱,移液器也會熱脹冷縮啦。它內部的空氣一膨脹,吸液量增加,結果就會不準確。理想的移液溫度為21.5℃(±1℃)。您的儀器和樣品的溫度應與工作的室溫相同,如果可以的話建議使它們先平衡20分鐘。在恒定溫度下移液器又可以將結果改善高達5%啦!
