實驗室新手指南之PCR儀

操作步驟

1. 開機：打開開關，視窗上顯示“SELF TEST”，顯示 10 秒中后，顯示 RUN-ENTER 菜單：準備執行程序。

2. 放入樣本管，關緊蓋子。

程序輸入與選擇

1. 如果要運行已經編好的程序，則直接按《Proceed》，用箭頭鍵選擇已儲存的程序，按《Proceed》，則屏幕顯示：按《Proceed》選擇 ENABLE，則開始執行程序。

2. 輸入新的程序：在 RUN-ENTER 菜單上用箭頭鍵選擇 ENTER PROGRAM，按《Proceed》選擇 NEW，命名新的程序，zui多 8 個字母，輸入后按《Proceed》確認(如何輸入字母、數字)；輸入程序步驟：名字輸入后，顯示，按《Proceed》則可以輸入溫度(0～100℃)，按《Proceed》確認后，則可以輸入孵育時間，用《Select》鍵移動光標，輸入數字，完成后按《Proceed》確認，跳到下一步，輸入方式同上；選擇 GOTO，輸入循環步驟時鏈接到第幾步(循環數zui多可達 9999次)(為實際循環數-1)。選擇 option,顯示：再選擇 increment,按《Proceed》確認，輸入初始的溫度，確認后輸入時間，按《Proceed》確認，然后輸入每個循環增加或減少的溫度，增加用正值，減少用負值(-0.1℃～6℃)，按《Proceed》確認。選擇 extend，按《Proceed》確認,輸入每個循環增加或減少的時間(-60～60 秒)，按《Proceed》確認；選擇 slop(指溫度上升或下降的速率),輸入溫度的改變值(-0.1～1.5℃)按《Proceed》確認，然后輸入加熱或致冷的速度，按《Proceed》確認；選擇 End，輸入結束步驟。

3. 輸入完成的程序后，到 RUN-ENTER 菜單，選擇新程序，開始運行。

4. 其它：用《pause》可以暫停一個運行的程序，再按一次繼續程序；用《stop》或《Cancel》可停止運行的程序。

5. 編輯程序：可以用《Cancel》鍵刪除輸錯的值，輸入新的值后按《Proceed》確認。對于未輸完的程序，要先輸入 END，按《Proceed》將程序儲存后才能刪除。刪除已經儲存的程序：從RUN-ENTER 菜單中選擇 RUN-PROGRAM，按《Proceed》，顯示主菜單，選擇 DELET,用《Select》選擇刪除。查看程序的步驟：在主菜單上選擇 LIST，按《Proceed》，用《Select》將選擇名稱，再按《Proceed》，顯示程序的*步，用《Select》鍵向前、向后翻頁查看，此時不能改變程序的值。

6. 編輯已有的程序：從 RUN-ENTER 菜 單 中 選 擇 RUN-PROGRAM， 按《Proceed》，顯示主菜單，選擇 EDIT，按《Proceed》確認，用《Select》鍵選擇要編輯的程序，按《Proceed》顯示程序的*步。用《Select》鍵將光標移到要改變的溫度或循環的值上，鍵入新值，按《Proceed》確認，按《Cancel》刪除鍵入的值，出現空格，鍵入新值后確認。注：一旦值被改變或刪除，原來的值不能恢復，必須重新鍵入。編輯時間值：必須重新鍵入小時、分鐘、秒，按《Proceed》。

PCR 體系設置

1. 預變性：可用 94～95℃，2～10min,一般用 5min。

2. 變性：一般用 94℃，30s~2min,一般 45s~1min。

3. 退火：溫度自定，30s~2min。

4. 延伸：70～75℃，一般 72℃，對于<2kb,<1min;>2kb,每增加1kb 加1min。

5. 循環數：一般 25～35 個循環。

6. zui終延伸：72℃，5～15min。

7. 保存：10℃，時間設為 0。

8. END。

PCR 儀使用中的一些小技巧

1. 仔細閱讀儀器使用說明書，這樣可以充分發揮儀器的性能并避免發生錯誤。

2. 程序設計完成后，一定要仔細檢查，以免出錯造成損失。

3. 常用的程序zui好調用以前使用過的正確程序文件；樣品量較小時，zui好在樣品槽的兩邊各加上兩排 8 聯管，這樣可使熱蓋平整，加熱效果好，有利于效果的穩定性。

4. 在進行各種試劑加樣時，相同的試劑要一起加后再分裝，要用同一只吸液器及同一個槍頭。

5. 加樣完成后，zui好用酶聯板離心轉頭將管離心一下，使反應液到管底，因為反應液在管壁或管蓋上時，會嚴重影響實驗結果。

PCR 儀的清洗

1. 樣品池的清洗：先打開蓋子，然后用 95%乙醇或 10%清洗液浸泡樣品池 5min，然后清洗被污染的孔;用微量移液器吸取液體，用棉簽吸干剩余液體；打開 PCR 儀，設定保持溫度為 50℃ 的 PCR 程序并使之運行，讓殘余液體揮發去除。一般 5～10min 即可。

2. 熱蓋的清洗：對于熒光定量 PCR 儀，當有熒光污染出現，而且這一污染并非來自樣品池時，或當有污染或殘跡物影響到熱蓋的松緊時，需要用壓縮空氣或純水清洗墊蓋底面，確保樣品池的孔干凈，無污物阻擋光路。

3. 儀器外表面的清洗：清洗儀器的外表面可以除去灰塵和油脂，但達不到消毒的效果。選擇沒有腐蝕性的清洗劑對 PCR 儀的外表面進行清洗。

4. 更換保險絲：先將 PCR 儀關機，拔去插頭，打開電源插口旁邊的保險盒，換上備用的保險絲，觀察是否恢復正常。

PCR 儀的維護

1. PCR 儀器需要定期檢測，視制冷方式而定一般半年至少一次。

2. PCR 反應的要求溫度與實際分布的反應溫度是不一致的，當檢測發現各孔平均溫度差偏離設置溫度大于 1～2℃時，可以運用溫度修正法糾正 PCR 實際反應溫度差。

3. PCR 反應過程的關鍵是升、降溫過程的時間控制，要求越短越好，當 PCR 儀的降溫過程超過 60s，就應該檢查儀器的制冷系統，對風冷制冷的 PCR 儀要較徹底地清理反應底座的灰塵;對其他制冷系統應檢查相關的制冷部件。

4. 一般情況如能采用溫度修正法糾正儀器的溫度時，不要輕易打開或調整儀器的電子控制部件，必要時要請專業人員修理或利用儀器電子線路詳細圖紙進行維修。