實驗概要
局部肺部疾病，如哮喘，慢性阻塞性肺病或肺癌的免疫療法的創新要求肺部目標細胞有一個完善的交付途徑。一個重要途徑是通過直接滴入到呼吸道而不是通過消化道。本試驗詳細的介紹了抗體獲得，重組細胞因子，抑制小分子和其他分子療法，以有效誘導和保護呼吸道的免疫反應。動物在可吸入麻醉下提供治療，將溶液滴入小鼠的鼻孔，在5分鐘內完成整個過程。物質進入肺部，以確保正確的傳遞，它可以用熒光染料標記，在肺部監測。此外，可以應用熒光標記抗原，可視化靶細胞抗原在體內的變化。
主要試劑
異氟醚(Forene?，Abbott GmbH，Wiesbaden，Germany，4831867)
氧(Conoxia? GO2X，Linde AG，Unterschlei?heim，Germany，cat. no.: 2020101)
磷酸鹽緩沖液(PBS)，無鈣或鎂(Gibco-Invitrogen，Life Technologies，Darmstadt，Germany，cat. no. 14190)
替代麻醉劑I：Avertin
1) 封閉液：10毫升T-戊醇(2 -甲基-2 -丁醇，Sigma-Aldrich Chemie GmbH，Munich，Germany，cat. no. 152463)和10 g 2 2，2 -三溴-甲醇(Sigma-Aldrich Chemie GmbH，Munich，Germany，cat. no. T48402)
工作溶液：2.5％
2) 0.25毫升封閉液和9.75毫升PBS
3) 渦旋10分鐘。使用前3個小時內準備，保存于4°C
4) 劑量：15-17微克/克(腹腔注射50-70μL，取決于重量)
替代麻醉II：氯胺酮(Ratiopharm GmbH，Ulm，Germany；封閉液：50毫克/毫升；終濃度為12毫克/毫升)，Xylazin((Rompun?腹腔注射液2％， Bayer Animal Health GmbH，Leverkusen，Germany，終濃度：1.6毫克/毫升)無菌PBS ；氯胺酮和二甲苯胺噻嗪用PBS混合，并保存于4°C，腹腔注射80-100μl，不建議這兩種麻醉藥(替代I和II)。卵清蛋白：白蛋白，雞蛋， 5X的結晶(Calbiochem，Merck KGaA，Darmstadt，Germany，cat. no. 32467 )
OVA-Texas Red(Invitrogen，Darmstadt，Germany，cat. no.: O23021)
臺盼藍(Biochrome AG，Berlin，Germany，cat. no.: L 6323)
DAPI ×2鹽酸(4’，6-Diamidino-2-phenylindole dihydrochloride，Life Technologies，Darmstadt，Germany，cat. no. D1306)
主要設備
1.5毫升的Eppendorf管，蒸壓(Eppendorf AG，Hamburg，Germany，cat.no.0030 120.086)
200μL槍頭，蒸壓(Starlab GmbH，Ahrensburg，Germany，cat. no. S1111-1006)
異氟醚輸送系統連接到氧氣(Eickemeyer Medizintechnik für Tier?rzte KG，Tuttlingen，Germany)
實驗材料
不同的實驗方案選擇不同的小鼠品系。過敏性哮喘模型，我們選擇BALB / c小鼠，因為它們有一個Th2型的遺傳背景。基因敲出分析出具有其他遺傳背景的可能性，也引起哮喘的特點(AHR的，炎癥，生產粘液等)。
實驗步驟
要根據試劑盒的指示，配置試劑保存于4°C或-20°C。注意：稀釋試劑應保存在無菌條件下，以排除可能的污染。試劑如果有需要的應進行過濾分裝。
程序
專欄1：發生哮喘小鼠的治療。
將小鼠分為不同的組，分裝于不同的籠子。對哮喘治療組和模型組在0和7天腹腔注射200μl OVA（卵）和明礬的混合物（卵/明礬）。對照組，在同一時間點用PBS與明礬的混合物。致敏后八天，在25，26和27天小鼠注射 25-50μL卵 （哮喘模型組和治療組）或PBS（對照組） 。此外治療組也可以在產生過敏原前（25-27天）注射 25-50μL 指示治療（如IL-6R）30分鐘到2小時。到28天對支氣管肺泡灌洗液和肺細胞懸液測量AHR。
注意：卵 /明礬混合液的準備：稱量5毫克卵清蛋白溶于10毫升0.9％氯化鈉，1g鋁硫酸鉀（注：明礬）溶于10毫升蒸餾水。然后吸取明礬到卵清蛋白溶液中加入NaOH調整pH值至6.5。然后放于室溫孵育1小時，輕輕搖動。4°C離心1500轉/5分鐘，棄上清。加入Aqua dest 10毫升懸浮卵 /明礬溶液。卵 /明礬溶液應在當天使用或4°C儲存第二天使用。
在將溶液應用于小鼠實驗之前，應進行體外細胞培養實驗，檢查其效率。
1. 將試劑稀釋到適當濃度并置于冰上。
2. 將小鼠放于麻醉設備的鼠盒中，用異氟醚麻醉30秒只1分鐘。
關鍵的一步：根據指示用麻醉設配、以避免傷害到小鼠。當小鼠不動了盡快將其移除鼠盒，此時小鼠的呼吸已略有放緩。把握時間是很重要的，是試劑成功應用于小鼠的關鍵。如果鼠麻醉不夠深，小鼠蘇醒會導致試劑的浪費，和不完整的生理作用。
3. 吸取25-50微升溶液。關鍵的一步：不要使用超過50μL滴鼻應用，因為這將降低吸收的效率和對鼠標有危險。
4. 將鼠移除鼠盒后，并保持它的脖子，頭部穩定。用手固定尾巴。頭部微微向后彎曲，保持呼吸道通暢，消除呼吸道阻塞。
5. 立即將吸取的溶液，仔細緩慢的滴入到鼻子。把鼠放回入籠內。
注意：確保小鼠處于清醒狀態。
6. 實驗完成后，處死小鼠取出肺，如Sauer et al. and Maxeiner et al 等方法進行分析。也可以來衡量呼吸道呼吸速率和采取血液樣本，以及進行支氣管肺泡灌洗等進行分析。