蠕蟲成蟲的固定與保存
1、線蟲
生理鹽水洗凈蟲體粘附的污物,然后用加熱至70~80℃的70%酒精或巴氏液(甲醛3份、生理鹽水97份)固定,冷卻后移至新的70%酒精或巴氏液中保存。小型線蟲(旋毛蟲、蟯蟲、鉤蟲等)宜用甘油酒精(70%酒精95ml、甘油5ml)加熱固定,保存于80%酒精中。也可用冰醋酸固定約半小時后移入70%酒精或甘油酒精中保存。
2、吸蟲
小型吸蟲可置于小瓶中,加生理鹽水,用力搖蕩數分鐘,倒去生理鹽水,注入固定液。較大的吸蟲應先放在薄荷腦酒精液(薄荷腦24g、95%酒精10ml)中,使蟲體肌肉松馳,用載玻片壓平后固定,或將洗凈后的吸蟲放在兩片載玻片間用細線緊扎壓平后固定。一般用10%福爾馬林固定,24h后移至5%福爾馬林中保存,也可用70%酒精固定0.5~3h,視蟲體大小而定,再移至新的70%酒精中保存。
3、絳蟲
大型絳蟲如豬、牛帶絳蟲,可將蟲體浸入自來水中8~12h,使蟲體在水中充分伸展、松馳,然后移至3%福爾馬林溶液中固定,24~28h后轉置5%福爾馬林溶液中保存。小型絳蟲可先在生理鹽水中清洗數次,然后于3%福爾馬林溶液中固定3~5h,再移入5%福爾馬林溶液中保存。如需染色制片時,將蟲體從上述3%福爾馬林溶液中取出后置載玻片上,用另一載玻片輕壓,沿載玻片邊緣滴加5%福爾馬林溶液固定數小時,最后移至5%福爾馬林溶液中保存。
三、昆蟲的保存
1、干標本的保存
系保存有翅昆蟲。可用特制的昆蟲針針插蟲體。大型昆蟲如蠅、虻等用1~3號昆蟲針,從蟲體背面、中胸右側直插。注意保存左側完整,以便鑒定。小型昆蟲如:蚊、蛉、蚋、蠓等,取00號短針插入軟木片的一端,然后用這個00號短針自胸部腹面、兩中足基部之間插入,不可刺透胸背,再用另一長針從軟木片的另一端插入,將針插好的昆蟲插入昆蟲盒的軟木板上。盒內放入紙包的樟腦粉防蛀。
2、濕標本的保存
用于保存有翅昆蟲的卵和幼蟲期及其無翅昆蟲和蜱螨類的發育各期。活標本先經加溫70%酒(60~70℃)固定,1d后保存于甘油酒精中,也可用5%或10%福爾馬林和巴氏液固定保存。
四、原蟲的低溫保存
用液氮保存原蟲,具有保持原蟲的生物學特性且保存時間較長(1~2年)的優點。現僅介紹瘧原蟲和陰道毛滴蟲的低溫保存方法。
1、凍存方法
(1)鼠瘧原蟲從感染瘧原蟲第3~4d的小鼠尾部(或心臟)取血,在1mm3陽性鼠血加0.1mm3的3.8%枸椽酸鈉抗凝之后,按0.5~1.0ml分裝入無菌安瓿(或塑料管)內,封口(或蓋嚴)后,放入標明日期的紗布袋中,裝于液氮罐的提筒內,立即直接置液氮中保存。
(2)陰道毛滴蟲用無菌拭子取陰道分泌物,放入培養基中培養48h,轉種于RPMI-1640培養基中2d。取含蟲培養液經1000rpm離心10min,在沉淀中加入10%DMSO2ml,如上法分裝及凍存。
2、復蘇與觀察需要時從液氮罐中取出保種小管,迅速投入37~40℃溫水中,經4~5min即溶化。將陰道毛滴蟲接種于肝浸湯培養基上,37℃培養3~4d后,涂片鏡檢活動的滋養體,或染色觀察。凍存的鼠瘧原蟲,經腹腔接種小鼠,每只0.2ml,接種后4~5天取鼠尾血,涂片,姬氏液染色鏡檢。
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