將基因轉移至未分化ES細胞實驗—融化96孔板上的細胞

ES 細胞凍存板MEF 滋養板塑料盒ES 生長培養基微量移液器

1. 準備下列試劑和材料：

96 孔 ES 細胞凍存板

24 孔 MEF 滋養板

塑料盒

ES 生長培養基

微量移液器

2. 在塑料盒內裝入無菌水，置溫箱中預熱。

3. 從 -80℃ 冰箱中取出 96 孔 ES 細胞板。

4. 欲融化的每孔加 100 μl 預熱（37℃）ES 生長培養基。蓋上蓋，在溫箱內的塑料盒中放 2 分鐘左右，使細胞快速融化。

5. 融化細胞轉移到每孔有 2 ml ES 生長培養基的 24 孔 MEF 滋養板。

6. 孵育 3~5 小時，ES 細胞吸附。

7. 換 2 ml ES 生長培養基。

8. 3 天后孔中克隆可見。

9. 每 1~2 天換一次 ES 生長培養基。充分生長后，細胞 1:5 傳代于 MEF 滋養板。