確診有賴于組織學活檢（包括免疫組化檢查及分子細胞遺傳學檢查），不僅可確診，還可做出分型診斷，這對了解該病的惡性程度，估計預后及做出正確的治療方案都至關重要。
正確處理和固定活檢物質對于正確診斷十分重要，正確處理活檢物質可以做一系列補充檢查，特別是免疫表型分析，細胞基因學分析，融合蛋白的分子學檢查及免疫球蛋白形式和TCR基因重排檢查，對正確診斷起輔助作用，首要原則是盡可能少使用侵入性操作過程，有胸腔積液者行胸穿進行細胞學檢查和免疫學檢查，經常可以在數小時內提供診斷，如果骨穿結果正常及沒有早期可以得到的積液，可以選擇縱隔外淋巴結進行活檢，如果可以取到的外周淋巴結活檢結果陰性，則可以在局麻下行胸骨旁縱隔切開術，也可以在X線指導下行縱隔腫塊的針刺活檢或針刺抽吸。
以淺部淋巴結腫大發病者，活檢可以確診，關鍵是對一些無痛性淋巴結腫大者要提高警惕，而原發于深部淋巴結者，則易漏診，故對長期發熱原因不明者，如懷疑為NHL應進行手術探查。
腹部巨大淋巴瘤患者由于代謝紊亂和腎功能異常，特別是快速生長的伯基特淋巴瘤，也給診斷帶來了困難，腹水經常包含有大量惡性腫瘤細胞，正確的細胞學檢查結合免疫表型檢查可以提供一個快速的診斷，而使患者免去了剖腹探查術和全麻的額外風險。
HL的診斷應包括分期鑒別診斷，確定分期后才能使病人接受合理的治療，國際上有幾個分期系統較為常用，本文介紹St、Jude分期，這一分期系統源于Ann Arbor霍奇金淋巴瘤分期系統。
