小鼠海馬神經元細胞的注意事項！
一、背景及概述
海馬椎體神經元是海馬區的主要成分，主要功能是參與近期記憶、情緒及內臟功能調節、是老年性癡呆、癲癇等疾病的主要病灶之一。小鼠海馬神經元細胞培養是研究神經細胞生物學特性和外源干擾因素作用(細胞因子)的有效細胞模型，其在神經生物學，發育生物學體外實驗研究中已被廣泛應用。
二、傳代培養
傳代前準備--胰蛋白酶消化--吹打分散細胞--分裝稀釋細胞--繼續培養
1)將培養瓶內舊的培養液棄掉，然后用D-Hanks液洗兩次，(一定要洗干凈，以免影響胰酶的消化作用)。
2)加入0.25%胰酶-EDTA消化，25cm培養瓶加0.4ml，37度消化5min，鏡下看到細胞變圓，間隙增大。
3)立即加含10%FCS的培養液終止消化，用細胞刮刀輕刮，注意，這時候用吸管吹不下來，但是刮刀卻很容易刮下來，而且對細胞的損傷極小。
4)離心，棄上清，加新的培養液(10%FCS)，小心吹勻，分裝入新的培養瓶。
三、注意事項
1、不要輕易改變培養液，我曾經把MEM換成1640后，細胞傳幾代后莫名其妙死亡。
2、如果想節省消化液，上面第2步可換成3-5mlDPBS洗，主要是去除培養瓶里會影響消化液作用的成分。
3、自配消化液一定要調PH（=7.8-8）值，并且注意分裝，-20度保存，避免反復凍融，用前37度預熱，消化較好較快。
4、嚴格的無菌操作。
5、適度消化：消化的時間受消化液的種類、配制時間、加入培養瓶中的量等諸多因素的影響，消化過程中應該注意培養細胞形態的變化，一旦胞質回縮，連接變松散，或有成片浮起的跡象就要立即終止消化。
四、相關研究
有研究觀察枸杞多糖對HT22細胞缺糖缺氧再灌注損傷的影響。方法：構建HT22細胞缺糖缺氧再灌注損傷模型，設正常組、模型組、枸杞多糖100，50和25mg·L-1組，檢測細胞存活率；并通過HE染色觀察形態學改變；檢測細胞內SOD，GSH-PX，MDA，T-AOC；利用流式細胞術檢測線粒體膜電位。結果：枸杞多糖100和50mg·L-1組能明顯提高細胞存活率，顯著改善缺氧缺糖再灌注損傷引起的形態改變；可顯著提高細胞內SOD，GSH-PX及T-AOC，減少MDA的產生；改善線粒體膜電位下降。結論：枸杞多糖能夠顯著減輕缺糖缺氧再灌注損傷引起的HT22細胞過氧化損傷。
此外，有研究探索十溴聯苯醚(PBDE-209)誘導小鼠海馬神經元細胞凋亡的潛在機制。方法原代海馬神經元細胞和海馬神經元細胞系HT-22用0、6.25、12.5、25、50和100μg/mLPBDE-209處理24h。檢測原代海馬神經元細胞SOD活性，MDA、NO和GSH的含量，用AnnexinV/PI雙染法檢測海馬神經元細胞系HT-22細胞凋亡情況，用免疫蛋白印跡Westernblot檢測Bax、Bcl-2、CHOP、GRP78、PERK和Caspase-12蛋白表達水平。結果染毒組原代海馬神經元細胞和HT-22細胞系細胞存活率顯著降低(P<0.05)。原代海馬神經元細胞MDA、NO含量顯著升高(P<0.05)，GSH含量、SOD活性顯著降低(P<0.05)；原代海馬神經元細胞的Bax/Bcl-2比值、CHOP、Caspase-12蛋白表達水平升高(P<0.05)。HT-22細胞系GRP78、PERK、Caspase-12表達水平和細胞凋亡率升高(P<0.05)。結論氧化應激和內質網應激可能參與PBDE-209誘導的海馬神經元細胞凋亡過程。
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