【注意事項】
1. 小鼠品系和性別：
多數研究表明，所使用的小鼠品系與獲得 BMDC 的數量和成熟度關系不大[9]，但也有研究表明C57BL/6小鼠可能更好。
Lutz表示從C57BL/10,DBA/2,C3 H/J和129等小鼠品系均可獲得足夠數量和純 度的 BMDC,但 Lutz
在其實驗中更傾向于使用 C57BL/6,ICR 和 BALB/c小鼠，且發現 C57BL/6
小鼠的BMDC產量最高，而且ICR小鼠和C57BL/6小鼠的BMDC對LPS 的成熟誘導敏感度高于BALB/c小鼠[8].
關于小鼠的性別，Inaba認為雄性小鼠更好些，因為他們的骨骼更大，從而可以獲 得更多的前體細胞[10],但多數學者更傾向于使用雌性小鼠。
因此，目前培養BMDC用的比較多的小鼠是雌性或雄性C57BL/6小鼠。
2. 單獨使用GM-CSF還是聯合使用IL-4?
Inaba經典法和Lutz大量制備法中均僅用GM-CSF即可誘導出相當數量的 BMDC,而且也在混合淋巴細胞反應中表現出較強的刺激作用，但其實這些 BMDC的成熟度并不足夠高。
研究顯示，GM-CSF+IL-4聯合誘導比GM-CSF單獨誘導產生的BMDC表達更高的MHC
II類分子和共刺激分子CD80和CD86等，提示前者具有更強的抗原遞呈能力，而且前者在混合淋巴細胞反應中表現出更有效的刺激能力[5,7].在動物實驗中也發現，GM-CSF+IL-4
聯合誘導的BMDC可產生保護性抗腫瘤免疫反應，而GM-CSF單獨誘導的BMDC的保護性較弱 [6],這些都說明
GM-CSF+IL-4聯合誘導的BMDC的成熟度高于GM-CSF單獨誘導的BMDC.
德國明斯特大學（University
of Munster）的Labeur研究也表明，單獨用GM-CSF誘導的BMDC為未成熟DC,GM-CSF和IL-4聯合誘導產生的BMDC
的成熟度居中，添加CD40L或LPS可進一步誘導BMDC完全成熟 [7].
因此筆者認為，要想獲得功能更好的BMDC,最好用GM-CSF和IL-4聯合誘導骨髓細胞。而且，如果能在Inaba經典法和Lutz大量制備法中添加IL-4,應該會獲得更加成熟、有效的BMDC.
3. 成熟誘導劑的選擇
LPS，CD40L和TNF-α無論對人DC還是小鼠DC均是常用、有效的成熟誘導劑，那么應該選擇哪個呢？
TNF-a 誘導DC的成熟能力在三者中最弱[7,8].LPS 和
CD40L均是DC體外完全成熟的強誘導劑，兩者誘導DC的成熟度相似，但誘導產生的細胞因子譜有差異。CD40L誘導成熟的BMDC在體內顯示出最強的免疫調節能力，包括保護性和治療性腫瘤免疫反應的產生[7].
用LPS刺激DC完全成熟所用的濃度一般為 1-10μg/ml，但其實0.1 μg/ml已經有非 常強的作用，但保險起見，一般選用1 μg/ml。
對于CD40L需要注意的是，CD40L分子屬于TNF配體家族，該家族的特點是在形 成三聚體后才能發揮作用。所以最好能用重組的CD40L三聚體蛋白來刺激DC,這樣會有很好的效果。如果用CD40L單體來刺激DC,多數情況下成熟度并不是很高。