驗方法原理 尿中17-羥類固醇為腎上層皮質所分泌的激素及其代謝產物，從尿中的排出量可反映腎上腺皮質的功能，加人56％硫酸和硫酸銨促使17-羥類固醇向有機相轉移，用氯仿正丁醇混合液自尿中提取。提取物加人鹽酸苯肼和硫酸與17-羥類固醇生成黃色苯肼衍生物（Porter_silber反應），與標準液經同樣處理比色得其含量。
試劑、試劑盒 純化氯仿純化正丁醇無水硫酸氨鹽酸苯肼皮質醇硫酸濃鹽酸
實驗步驟
一、 實驗試劑：
1. 純化氯仿：250ml 2. 純化正丁醇： 25ml
3. 無水硫酸氨：50g 4. 鹽酸苯肼：65mg
5. 皮質醇標準：2ml 6. 56%硫酸：分析純
7. 濃鹽酸：分析純
二、實驗試劑配制：
1. 氯仿正丁醇混合液，按體積比10：1配制。
2. 56％硫酸：體積比
3. 苯肼-硫酸試劑：取鹽酸苯肼65mg加人56%硫酸100ml加NaCL 2g 冰箱中可保存二個月。
4. 標準管：每管加0.1ml標準液置室溫中干燥，蓋緊放暗處保存，每次取一管使用。
三、實驗測定方法：
l. 標本收集：收集24小時尿液于干潔容器內（留第一次尿應加濃HCL 5ml 防腐）量其總體積50ml樣品送檢。
2. 提取：取尿液3ml于50ml帶塞燒瓶中，加入56％硫酸0.1ml和無水硫酸按2.5g輕搖使其溶解，加入氯仿正丁醇混合液15ml加塞振搖3分鐘，將內物倒入尖底離心管內，以1500轉/分離心10-15分鐘，吸去上層尿液．留下氯仿正丁醇提取液備用。
3. 顯色。取帶塞潔凈試管按下表操作：
各管用力振搖2min靜止30min(或1500轉/分離心15min)將上層（硫酸苯肼混合液）分別吸人潔凈管內。置56℃水浴中25分鐘。取出后在410nm波長用0.5cm光徑比色杯，以比色空白管調零，讀取各管光密度值。
四、計算：
17-羥類固醇(mg/24h)=(A-B)/C×0.02×總尿量
正常范圍：男性：5-14mg/24小的尿
女性：4-14mg/24小時尿
| 注意事項 | 1. 顯色反應為非特異性，葡萄糖. 果糖. Vc. 去氫Vc. 尿酸. 丙酮磺胺甲基嘧啶. 奎寧等可引起干擾。但氯仿-正丁醇混合液排除效果好，需注意尿液分離避免點滴帶入顯色液內。 |
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