常用溶液的配制

實驗概要

    了解常用溶液的配制方法。

實驗步驟

1.      1 mol/L Tris-HCl 溶液（pH 8.0）：稱取 12.191 g Tris，溶于 80 mL 雙蒸水  中，用濃鹽酸調 pH 8.0，定容至 100 mL，高壓滅菌 15 min，室溫保存。

2.      50 mmol/L Tris-HCl 溶液（pH 8.0）：稱取 0.606 g Tris，溶于 80 mL 雙蒸水中，用濃鹽酸調 pH 8.0，定容至 100 mL，高壓滅菌 15 min，室溫保存。

3.      0.5 mol/L EDTA 溶液（pH 8.0）：稱取 18.61 g Na₂EDTA·2H₂O 溶解于 80 mL 水中，磁力攪拌器上劇烈攪拌，加入 NaOH 固體約 2 g，再滴加 NaOH 溶液調 pH 至 8.0，定容至 100 mL，高壓滅菌15 min，室溫保存。

4.      TE 緩沖液（10 mmol/L Tris，1 mmol/L EDTA，pH 8.0）：于 80 mL 雙蒸水中，加入 1  mL 1 mol/L Tris-HCl 溶液，0.2 mL 0.5 mol/L EDTA 溶液，調 pH 至 8.0，加水定容至 100  mL，高壓滅菌 15 min，室溫保存。

5.      20 mg/mL 蛋白酶 K：稱取 0.2 g蛋白酶 K溶于 10 mL 雙蒸水中，分裝貯存于 -20℃。

6.      5 mol/L NaCl 溶液：稱取 29.22 g NaCl，加入 80 mL 雙蒸水，攪拌溶解后，定容至 100 mL，高壓滅菌 15 min，室溫保存。

7.      CTAB/NaCl 溶液（0.7 mol/L NaCl，10％CTAB）：稱取 4.1 g NaCl，溶于80 mL  雙蒸水，磁力攪拌器攪拌的同時，緩慢加入 10 g CTAB，必要時可以 65℃加熱促溶，冷卻至室溫后，加水定容至 100 mL，高壓滅菌 15  min，室溫保存。

8.      3 mol/L 乙酸鈉溶液（pH 5.2）：稱取 40.8 g CH₃COONa·3H₂O，溶于 80 mL雙蒸水中，用乙酸調校至 pH 5.2，加水定容至 100 mL，高壓滅菌 15 min，室溫保存。

9.      苯酚/氯仿/異戊醇（PCI，25∶24∶1）：將重蒸酚、氯仿、異戊醇按體積比 25∶24∶1 混合，上層以 0.1 mmol/L Tris-HCl（pH 8.0）溶液液封，置棕色瓶中 4℃保存。

10.  氯仿/異戊醇：96 mL 氯仿與 4 mL 異戊醇混合，4℃保存。

11.  0.1 mol/L CaCl₂ 溶液：稱取無水 CaCl₂（分析純）2.77 g，加入 200 mL雙蒸水充分溶解，定容至 250 mL，高壓滅菌，4℃保存。

12.  0.5 mol/L CaCl₂ 溶液：稱取無水 CaCl₂（分析純）13.85 g，加入 200 mL雙蒸水充分溶解，定容至 250 mL，高壓滅菌，4℃保存。

13.  氨芐青霉素（Amp）儲存液（100 mg/mL）：稱取氨芐青霉素 1 g，溶于10 mL 水中，過濾除菌，分裝貯存于 -20℃。

14.  羧芐青霉素（Car）儲存液（100 mg/mL）：稱取羧芐青霉素 1 g，溶于 10 mL 水中，過濾除菌，分裝貯存于 -20℃。

15.  IPTG 儲存液（100 mmol/L）：稱取 IPTG 0.74 g，溶于 10 mL 水中，過濾除菌，分裝貯存于 -20℃。

16.  X-gal 貯備液：將 X-gal 溶于二甲基甲酰胺中，配成 20 mg/mL 濃度的溶液，裝入玻璃瓶或聚丙烯管中，裝溶液的管應以錫鉑包裹以防見光使X-gal 受到破壞，應貯存于 -20℃保存。該溶液不必過濾除菌。

17.  10% SDS 溶液：稱取 10 g SDS（分析純）溶于 100 mL 雙蒸水中，室溫保存。

18.  10% 過硫酸胺（APS）：稱取 0.1 g過硫酸胺溶于 1 mL 雙蒸水中，現配現用。

19.  50 × TAE電泳緩沖液：

         Tris                                               242 g

         EDTA (0.5 mol/L，pH 8.0)       100 mL

    冰乙酸                                       57.1 mL

       加雙蒸水定容至 1000 mL。

20.  SDS-PAGE 蛋白電泳試劑

     1). 30% 聚丙烯酰胺溶液：

       溶解后定容至 100 mL，裝于棕色瓶，4℃保存。

     2). 2 × 加樣緩沖液：

       加雙蒸水定容至 100 mL，分裝后 -20℃保存。
  3). 蛋白電泳緩沖液（4 ×）：
 

        定容至 500 mL。      4). 4 × 分離膠緩沖液：1.5 mol/L Tris-HCl （pH 8.8）

      5). 4 × 濃縮膠緩沖液：0.5 mol/L Tris-HCl （pH 6.8）

      6). 染色液：

      7). 脫色液I：甲醇∶水∶冰醋酸 = 40∶53∶7

      8). 脫色液II：甲醇∶水∶冰醋酸 = 5∶88∶7

21.  ELISA 分析試劑

      1). 包被緩沖液（0.1 mol/L Na₂CO₃，0.1 mol/L NaHCO₃，pH 9.6）：

         Na₂CO₃                     1.06 g

         NaHCO₃                    0.84 g

         溶于 80 mL 雙蒸水中，調 pH 9.6，定容至 100 mL，高壓滅菌室溫保存。

      2). 磷酸鹽緩沖液（10 × PBS）（1.37 mol/L NaCl，0.027 mol/L KCl，0.1 mol/L Na₂HPO₄，0.02 mol/L KH₂PO₄，pH 7.4）：

          NaCl                       40 g

          KCl                            1 g

          Na₂HPO₄              7.1 g

          KH₂PO₄                1.2 g

          溶于 400 mL 水中，加 HCl 調 pH 7.4，定容至 500 mL，高壓滅菌，室溫保存。

       3). 洗滌液 PBST（PBS，0.1% Tween-20）：以PBS∶Tween-20 = 100∶0.1 的體積比于 1 × PBS 中加入 Tween-20，混勻，4℃保存。

       4). 封閉液（PBST，5% BSA）：臨用前，于 20 mL PBST 中，加入 1 g BSA，充分溶解。

       5). 稀釋液（PBST，1% BSA）：臨用前，于 10 mL PBST 中，加入 0.1 g BSA，充分溶解。

       6). 反應終止液：2 mol/L H₂SO₄。

21.  Western blot 試劑

      1). 轉印緩沖液（10 ×）（1.92 mol/L 甘氨酸，0.25 mol/L Tris，pH 8.3）：

    溶于 400 mL 雙蒸水中，調 pH 8.3，定容至 500 mL，4℃保存備用。使用前以雙蒸水稀釋，如有必要，加入甲醇（體積終濃度為 10% - 20%）。

       2). 磷酸鹽緩沖液（10 × PBS）（1.37 mol/L NaCl，0.027 mol/L KCl，0.1 mol/L Na₂HPO₄，0.02 mol/L KH₂PO₄，pH 7.4）：

         溶于 400 mL 雙蒸水中，加 HCl 調 pH 7.4，定容至 500 mL，高壓滅菌，室溫保存。

       3). PBST（PBS，0.05% Tween-20）：以 PBS∶Tween-20 = 100∶0.05 的體積比于 1 × PBS 中加入 Tween-20，混勻，4℃保存。