1.四氯化碳體外損傷肝細胞模型
原代培養的正常大鼠肝細胞培養24h(貼壁良好)后,置培養皿于一密閉的塑料盒,內置四氯化碳0.4M容積,37度90min,造成肝細胞損傷的模型,后轉入正常培養,進行下一步實驗。(即熏蒸法)
肝細胞培養12h后,吸棄上清,更換培養液并加入CCL4 8mM(事先用DMSO溶解,DMSO終濃度1%),作用6h后收集24孔板中培養上清檢測AST以及肝細胞MDA含量盒GSHpx活性,評價損傷程度。(常用方法)
2.醋氨酚體外損傷肝細胞模型
肝細胞培養24h后,用清洗液洗2次,培養液洗1次,然后換以20mM醋氨酚的培養液,繼續培養12h,取培養液,進行下一步實驗。
3.過氧化氫體外損傷肝細胞模型
肝細胞培養24h后,吸棄上清液,更換培養液并加入H2O2 0.6mM,作用1h后,收集24孔板中的培養上清液檢測AST活性和MDA含量。
4.氰化鉀缺氧肝細胞損傷模型
肝細胞培養24h后,貼壁生長良好的肝細胞中加入氰化鉀2.5mM,繼續培養2h,定量檢測培養液上清中LDH活性,以及酶的活性反應肝細胞損傷程度。本模型可以更好的模擬缺氧損傷。
5.硫代乙酰胺(TTA)體外肝細胞損傷模型
肝細胞預培養24h后,貼壁生長良好的肝細胞中加入TTA0.18mM,繼續培養48h,肝細胞大量損傷和壞死,上清液中乳酸脫氫酶(LDH)活性升高,造成體外損傷肝細胞模型。
6.內毒素體外損傷肝細胞模型
貼壁生長良好的肝細胞中加入內毒素70uL/mL,置37度,5%CO2培養此時上清LDH活性升高造成肝細胞損傷模型,造成體外肝細胞損傷模型。
7.半乳糖胺(GalN)體外損傷模型
分離肝細胞,預培養12-24h后,待細胞貼壁生長均勻后,加入5mMGalN的肝細胞培養液,繼續培養1.5h,測定培養上清液中ALT,ALT顯著升高時,肝細胞造模成功。