六、Alzhermer病的動物模型
SD大鼠200-250克。用3%戊巴比妥鈉(35-40mg/kg體重)腹腔麻醉動物后,固定在腦立體定位儀上(參照大鼠全腦立體定位圖譜),以前囟為零點,選出進刀坐標:前后坐標(AP)1.8mm,中線旁開(L)坐標1.0mm,腹側坐標(v)4. 0mm。首先用牙科鉆在上述坐標的鉆孔開骨窗,去除顱骨,挑開硬腦膜,用自制雙刃不銹鋼刀片(寬2mm,厚0.1mm)按上述坐標從腦冠狀面插入腦內。然后,將刀向外移動1.5mm,再降刀1mm,并上下抽刀10余次,以完全切斷彎窿海馬傘。最后將刀片退至L1.0mm處,抽出刀片。
動物分組
1. 實驗組:10只,按上述方法切斷左側穹窿海馬傘;
2. 假手術組:10只,開顱并挑開硬膜膜,切斷皮質,但不切斷穹窿海馬傘,最后縫合頭皮;
3. 空白對照組:10只,做水迷宮行為學檢測和電生理檢驗。以Morris水迷宮行為學檢測。(提供兩種數據)定位航行能力。
七、神經系統疾病模型
實驗性變態反應性腦脊髓炎(experimental allergic encephalomyelitis,EAE) 是一典型的實驗模型。早在1944年Ferraro根據對一系列實驗結果的總結,指出EAE和人的脫髓鞘病有相似之處。1947年Freund等報告,以腦或脊髓加Freund佐劑(FA) 進行免疫,僅需一次注射就能引起豚鼠EAE,而且成功率相當高。以后,以兔、小鼠、大鼠、 羊、貓、田鼠及猴等動物用同樣方法均能復制成功,以豚鼠最為敏感。這里介紹用同種脊髓加FA進行免疫復制EAE的方法。
Freund氏左劑的制備參照Paterson的制法,液體石臘(c.p)8.5ml,無水羊毛脂(c.p)1.5ml,結核菌。用上述混合液配成4mg/ml的FA。高壓滅菌后使用。
脊髓組織懸液:于實驗當時,在無菌條件下先將豚鼠肝素化,然后經胸主動脈用生理鹽水灌洗至無血。取出脊髓,除去脊膜,稱重,用玻璃研磨器將脊髓研成勻漿,以生理鹽水配制成50%懸液。
脊髓-FA乳劑的制備:將脊髓組織懸液與FA按1:1混合,用注射器反復抽注,即成乳劑。
選用體重400g左右的豚鼠,于豚鼠的四個足掌肉墊各注射脊髓-FA 0.1ml, 每只豚鼠共注射0.4ml。注射后按常規飼養。
免疫注射半月后,血清中逐漸出現抗脊髓抗體,皮膚試驗呈延緩反應,而且豚鼠陸續出現后肢癱瘓,甚至大小便失禁,很易死亡。血清補體結合反應:由豚鼠心臟抽血,以3,000轉/分離心30分鐘分離血清。 抗原為1%脊髓生理鹽水懸液,也經3,000轉/分離心1小時,取其上清液作試驗用。補體為2應用單位,溶血系統為2%綿羊紅細胞及2單位的溶血素。
皮膚試驗:將豚鼠背部剃毛,用10%同種脊髓生理鹽水懸液0.1ml作皮內注射, 注后當時及24、48小時觀察皮膚反應。本實驗在注后當時不見皮膚反應,而在24小時出現紅斑或硬結,48小時仍存在,所以是延緩型反應。
組織學檢查:在實驗終了時處死動物,取出腦及脊髓等欲檢查的臟器,福爾馬林固定,常規切片、染色作鏡檢。可見脊膜及中央管周圍有明顯的淋巴樣組織浸潤、增厚,脊髓白質內有細胞浸潤的小灶狀病變及靜脈周圍呈套袖樣浸潤。神經細胞有壞死,細胞核消失呈勻質小體,或細胞體消失留下一空隙,以及細胞周圍有圓細胞浸潤等。在腦組織中可見到腦膜增厚,淋巴樣細胞及單核細胞浸潤。室管膜及脈絡膜亦呈同樣變化。小靜脈及毛細血管周圍,則呈套袖狀細胞浸潤。腦實質內有小膠質細胞組成的浸潤灶。有些星狀細胞呈核碎裂、胞漿蒼白、細胞變形等。上述變化以脊髓的病理改變和癱瘓最為一致,是最特異的變化,僅見于注射脊髓加FA引起癱瘓的動物。血清抗體雖也有特異性,但與癱瘓或脊髓病變的程度無一致性關系;而皮膚反應則既有特異性,又與癱瘓及脊髓病變呈一致性。文獻報導還曾指出,這種模型不能用血清抗體進行傳遞,但用淋巴細胞被動傳遞則能成功。提示病變的本質屬于細胞免疫機制。至于腦內的變化,特異性較差,用FA或其它組織懸液加FA注射的動物也能發現,唯程度輕的多,可能是FA本身引起的,也可能因為其它組織和腦脊液之間有某些共同抗原性,從而引起交叉反應之故。
八、動物高血壓模型的建立
1.直接刺激中樞神經法
采用埋藏電極或借助于立位定各器,是刺激大白鼠或猴的側下丘腦防御警覺區,可使動物血壓明顯升高,心率加快和心輸出量增加等。
2.神經反射性高血壓
可選狗進行,以波長0.1毫秒、頻率5~50次/秒的方波刺激狗的隱神經、喉上神經或精神迷走神經中樞端,刺激時間為15秒,可使狗的收縮壓和舒張壓均升高20~100mmHg。
3.腎源性加壓物質的注射法
選用大白鼠、家兔或狗,實驗前將動物兩側腎臟摘除,手術后幾小時或經24小時后,給動物靜脈注射或滴注腎提取物、腎素或人工合成的血管緊張素(Angiotensin)均可使血壓明顯升高。切除動物腎臟后幾小時,血中血管緊張素原(Angiotensinogen)即開始上升。24小時后可增達高峰,大白鼠血中血管緊張素原值可增加14~15倍,狗約增加3倍。從而大大提高了動物對外源性腎臟加壓物質的敏感性。
4.體液性加壓物質注射法
選用狗、貓或兔按2~8μg/Kg劑量靜脈注射腎上腺素或去甲腎上腺素時,可引起血壓顯著而短暫的升高。給大白鼠靜脈注射0.5~3μg腎上腺素或去甲腎上腺素,亦可出現與上相似的血壓上升。若欲使血壓維持長時期的升高,可采取上述藥物靜脈滴注給藥。給狗或貓靜脈注射0.1~0.6μ后葉加壓素或給大白鼠靜脈注射0.006~0.008u后葉加壓素,均可導致受試動物的血壓顯著上升,但重復注射易出現耐受現象。
5.子宮胎盤缺血型急性高血壓法
選用妊娠家兔,通過胎盤作“Z”字形縫合,造成子宮胎盤缺血,手術后血壓逐漸升高,于1/2~2小時升達高峰。但注意縫線不要穿過子宮壁,否則將不發生高血壓。