1、血漿皮質醇水平和晝夜節律測定
正常人皮質醇呈脈沖式分泌，有明顯的晝夜節律。庫欣綜合征患者血漿皮質醇水平增高且晝夜節律消失。
2、24h尿游離皮質醇（UFC）測定
測定24hUFC可避免血皮質醇的瞬時變化，也可避免受血中皮質類固醇結合球蛋白濃度的影響，對庫欣綜合征的診斷有較大的價值，診斷符合率約為98%，但一定要準確留取24h尿量，并且避免服用影響尿皮質醇測定的藥物。
3、地塞米松抑制試驗
這是確診庫欣綜合征的必需實驗。不論是經典的小劑量地塞米松抑制試驗（LDDST），還是簡化的過夜法，其診斷符合率都在90%以上。
4、午夜唾液皮質醇測定
因唾液中只存在游離狀態的皮質醇，并與血中游離皮質醇濃度平行，且不受唾液流率的影響，故唾液皮質醇水平的晝夜節律改變和午夜皮質醇低谷消失是庫欣綜合征患者較穩定的生化改變。其敏感性和特異性均可達95%～98%。