血漿促腎上腺皮質激素釋放激素（CRH）測定
參考值：0.2～2.2pmol/L(1～10pg/ml)
常用方法：放免法。在孕婦體內，血漿CRH值可隨妊娠天數的推延而增高，最高可達585pmol/L(2700pg/ml)。盡管不少研究認為：血漿CRH值的高低與血ACTH和血皮質醇(F)無關，也不能反應HPA軸的功能改變，但其在異位CRH綜合征中顯著升高，使之在該病的診斷中仍有意義。
血漿ACTH測定
參考值：晨8AM：4.5～18pmol/L(20～80pg/ml),4PM：＜1.1～2.2pmol/L(20pg/ml)。
該激素值與血F同步測定時意義更大。在原發于腎上腺皮質的庫欣綜合征中，血漿ACTH下降甚而測不出，而血F升高。相反，在庫欣病和異位ACTH患者ACTH和血F同時升高(午夜采血測定值)，異位ACTH患者ACTH值最高，但其值與其他原因所致的血ACTH增高有一定的交叉。如僅靠測晨血ACTH無法鑒別上述3種疾病。
影響因素：
1、血漿ACTH的半衰期僅8分鐘左右，在室溫下不穩定可被血細胞和血小板的酶所降解，并可黏附于玻璃和某些塑料的表面致使所測值偏低。
2、血樣本采集，處理和貯存方式的不當也會影響ACTH的測定值，檢測用的不同試劑盒各自所用的ACTH抗體也會導致結果的偏差。
3、病人處于如發熱、疼痛、外傷等急性應激狀態及終末期疾病時，ACTH分泌均會升高。而嚴重抑郁癥，尤其是老年患者其體內的ACTH水平也高于正常人。
改進方法：
1、病人住院第一夜不宜采血。(新的環境對有些患者也是一種應激)
2、用靜脈埋管采血，采血后迅速送檢，注意冰凍低溫保存。
3、采血時間不宜太長，如超過2～3分鐘需仔細斟酌結果的可靠性。
4、詳細詢問病史，評價患者是否處于急性應激狀態及有否精神疾患。近階段或目前是否服用皮質激素類藥物。
現在測定ACTH多用“夾心”放免法，先使用一抗與血中ACTH結合，再用二抗。這種方法比用單一抗體更特異。但這種方法診斷異位ACTH綜合征不夠敏感，這是因為異位ACTH患者血中具有免疫活性的ACTH大部分都是未經處理和處理不全的POMC分子，POMC與ACTH的中間產物和ACTH片段。它們可以和完整的ACTH分子競爭結合用于測試的兩個抗體中的任一個，導致ACTH值偏低。總的說來，這種方法仍優于以前所用的任一種。
巖下竇采血測定ACTH值(IPSS)
大多數人的垂體靜脈回流至海綿竇，并匯入巖下竇靜脈。在庫欣病的患者中，垂體腺瘤分泌過多的ACTH造成中樞和周圍血的ACTH濃度梯度，因此巖下竇采血測ACTH值可用于鑒別增高的ACTH是否為垂體腺瘤分泌。但腺瘤的ACTH分泌也呈脈沖式，隨機采血未必能得到陽性結果。所以采血前用一定量CRH可**腺瘤分泌。此外垂體靜脈引流呈分側傾向，所以有人認為也可用此法判定垂體微腺瘤的偏側。
方法：兩側股靜脈穿刺置管于雙側巖下竇，將第三管置于周圍靜脈。在靜注牛或綿羊CRH(1μg/kg)前，及后2、5、10分鐘同時采巖下竇和周圍血ACTH,比較兩者的ACTH值。如激發前比值≥2.0或激發后≥3.0，則庫欣病的可能性大，如＜2.0則異位ACTH合癥的可能性大。
影響因素：
1、罕見的異位CRH瘤可使巖下竇血中的ACTH升高；
2、血皮質醇未高到抑制垂體分泌ACTH的水平，使假陽性升高；某些對甲吡酮有反應，類固醇代謝產物增多的異位ACTH綜合征患者可對CRH有反應，產生假陽性。
3、巖下竇靜脈解剖變異，未能準確定位，出現假陰性。
改進方法：IPSS同時常規檢查CRH和血F；在血F高水平時進行采血；提高醫生的業務水平。
該方法遇到有經驗的放射科醫生，可提高診斷的正確率，敏感性、特異性甚可達100%。但仍有5%～10%的病人對CRH**無反應，而還有極少的異位ACTH綜合征和腎上腺病病人對CRH**有反應。目前認為大多數垂體微腺瘤都居于中線附近，因此該方法在垂體微腺瘤的定位中診斷意義不大。在區分庫欣病和HPA軸功能正常的單純性肥胖、假庫欣或CRH瘤的患者中無很大優勢。這項檢查還有一定的創傷性，可并發腦血管意外(發生率0.1%～0.2%)及其他次嚴重的并發癥如腹股溝血腫，陣發性心律失常，和右心房穿孔率(發生率達20%)，因此不少學者不主張將此實驗做為檢查常規，僅在鑒別一些較難診斷的庫欣病和慢性異位ACTH綜合征的鑒別診斷中應用，特別是其他實驗不能提供足夠信息時，如：8mg**不能抑制，In-奧曲肽掃描結果陰性；或診斷明確為庫欣病，垂體腺瘤摘除術后ACTH分泌未顯著下降者。
皮質醇(F)測定
(一)血皮質醇(血F)
大多數庫欣綜合征病人的晨8AM血F可正常或稍高于正常范圍,但入睡后1h的血F可升高或與白晝相等。但如腎上腺皮質功能減退和先天性腎上腺皮質增生的患者的午夜血F水平則和正常人無區別也可低到測不出。因此需根據不同的病因，選擇采血的時段。人的血清或血漿皮質醇從最早的Porter～Siber色譜原測定法、蛋白競爭結合法發展到目前廣泛運用的放免法、高效液相層析法，歷經多種技術的革新已經獲得較令人滿意的敏感性和特異性。現在的放免法有專用的試劑盒使血F的測定更加方便快捷。
參考值：
8AM：275～550nmol/L
4PM：85～275nmol/L
11PM：＜140nmol/L（最好是入睡后1h)
影響因素：
1、各個實驗室所用方法不同。
2、最近或正在服用糖皮質激素類藥物。
3、有應急或晝夜節律的紊亂。
4、血F水平實際上反應體內ACTH的水平。因此除近期短時間服用氫化可的松或可的松外，那些影響血ACTH水平的因素如：晝夜節律，應急狀態，生活事件及激素類用藥均可導致血F水平的異常波動。而血F的半衰期80分鐘長于ACTH，因此血F對外來**反應稍滯后于ACTH。這可影響血F和ACTH同步測定的意義。
5、由于雌激素可誘導肝臟皮質醇結合蛋白(CBG)合成增加，因此孕婦和口服避孕藥者日間皮質醇水平往往可達50μg/dl，但皮質醇和CBG解離速度很快，故這些患者應以入睡后一小時皮質醇測定值為準。
6、肝腎功能衰竭者體內皮質醇水平無明顯變化，腎功能衰竭患者體內可積聚某些皮質醇代謝產物，影響某些放免法測定的結果。
7、甲狀腺素可調節皮質醇的代謝速度，但不影響HP軸的反饋，因此甲亢和甲減時均不影響血F的水平。
8、體重也對皮質醇無甚影響，但嚴重營養不良可影響皮質醇的代謝，使血皮質醇水平升高。
9、年齡與血F水平無關，但是出生9月到一年以內的嬰兒體內尚未建立晝夜節律，且剛出生幾天內血皮質醇水平低于皮質酮，故此時血F水平偏低。
10、抑郁，尤其是嚴重抑郁癥其血F的水平和節律可與庫欣綜合征患者的表現如出一轍。
11、一些誘導肝臟合成細胞色素酶(CYP)的藥物，如：苯**，苯妥英鈉，異煙肼，氨基導眠能，米托坦等，均可導致激素水平升高。這些藥物在正常人中并不改變血皮質醇水平，但可以干擾**抑制試驗和甲吡酮**試驗的結果，并使激素替代治療的用藥量加大。
12、濫用酒精可使血中肝酶濃度增高尤其是γ－糖胺轉移酶使血漿皮質醇水平升高引起庫欣綜合征。
13、間歇性高皮質醇血癥患者緩解期內血F可正常。
改進方法：
1、由于HPA功能軸的興奮呈晝夜節律變化，而幾乎所有的庫欣綜合征患者的HPA的晝夜節律都消失。因此測定午夜血F在診斷庫欣綜合征中頗有價值，其診斷的敏感性和特異性分別為100%和77%，可100%地區分由酗酒和抑郁引起的類庫欣綜合征。如與晨8AM血F同時比較，則特異性可升至85%。總結瑞金醫院1975年到1998年173例確診庫欣綜合征病人的病史資料發現在庫欣綜合征的診斷中，血F晝夜節律消失(8AM，4PM，0AM三點法)的敏感性最高，可達94.7%。
2、仔細詢問病人的病史有無影響測定結果的服藥史，妊娠，及應急性生活事件對臨床上可疑但實驗指標不支持者可連續多次測定，或同時評價其他診斷指標。