1. 試劑每個批號均獨立優化,請不要混用或稀釋試劑以免降低敏感性;
2. 加入一抗后膜不能再干燥;
3. 適當地封閉和洗滌膜片至關重要;
4. 使用前配置化學發光試劑,配置足夠覆蓋膜片即可,棄去使用過的混合試劑;
5. 使用干凈取樣頭取用每種試劑;
6. 第一張片子建議曝光1分鐘,觀察結果后判斷最佳曝光時間可從30秒至2小時不等;
7. 除了放射自顯影片曝光和洗片處理外,所有步驟均不必在暗室中操作;
8. 膜片可經適當方法洗脫原有抗體,再次印跡使用,在此情況下,此試劑更為理想;
9. 因為它不象生色物質需要從膜片上清除底物。
10. nan3能抑制HRP活性,應避免使用nan3。