1、稱取新鮮除脂肪和筋膜的碎牛肉500g，加蒸餾水1000mL和1mol/L氫氧化鈉溶液25mL，攪拌煮沸15min，充分冷卻，除去表層脂肪，澄清，過濾，加水補足至1000mL。加入除碎肉渣外的各種成分，校正pH。
2、碎肉渣經水洗后晾至半干，分裝15mm×150mm試管約2～3cm高，每管加入還原鐵粉0.1～0.2g或鐵屑少許。將上述液體培養基分裝至每管內超過肉渣表面約1cm。上面覆蓋溶化的凡士林或液體石蠟0.3～0.4cm。121℃高壓滅菌15min。
