庚型肝炎病毒(HGV)呈世界性分布,與人類急性和(或)慢性肝炎有關。主要以血液途徑傳播,如輸血及血制品、靜脈吸毒、使用污染的注射器、經常接觸血源等。HGV為單股正鏈RNA病毒,基因組全長9 392個核苷酸。基因結構分為:5’非編碼區、編碼區(結構區和非結構區)、3’非編碼區,結構區編碼核心蛋白和包膜蛋白,非結構區有NSl、NS2、NS3、NS4、NSs等5個區,其中NS2編碼蛋白酶。庚型肝炎病毒(HGV)實驗室檢測指標主要為HGVAb-IgG。
[測定方法] ELISA法
[方法學原理] 庚型肝炎病毒(HGV)特異性抗原預包被于微孔板條上,樣品加入已有樣品稀釋液的反應孔中,在隨后的溫育過程中,若樣品中含特異性抗體(HGVAb—IgG),則該抗體與包被抗原形成抗原—抗體復合物被吸附到微孔板上,再加入酶標記的第2抗體,最終形成抗原—抗體—酶標記第2抗體復合物,洗滌除去未結合的游離酶,加入顯色劑后顯色。反之,若樣品中不含特異性抗體(HGVAb-IgG),則加入顯色劑后不顯色。
[標本準備] 靜脈抽血2ml,不抗凝。
[試劑]
1.包被反應板
2.樣品稀釋液
3.陰性對照
4.陽性對照
5.洗滌劑
6.酶標記第2抗體
7.顯色劑A、B
8.終止液
[儀器設備] 酶標儀或全自動酶聯免疫檢測儀。
[測定步驟]
1.用加樣器在微孔反應條中加入樣品稀釋液,每孔100ul。
2.將待測標本各l0ul分別加人已有樣品稀釋液的各孔中,直接加陰性對照、陽性對照各100u1,設空白對照1孔。
3.充分混勻,37℃環境中溫育20min。
4.傾去內容物,用洗滌液洗板5次,確保每次吸凈無殘留,全部洗完后在吸水紙上用力拍干。
5.各孔加入酶標記第2抗體100fA,振蕩混勻。
6.傾去