建立標準化的RNAseq，為液體活檢掃清障礙

　　檢測一管血液或尿液，通過其中的標志物來幫助診斷或治療疾病，這個新思路讓人們激動不已。不過，盡管RNA測序（RNA-seq）越來越多地用于小片段RNA的分析，但文庫制備方法的準確性和重復性還是存在問題。

　　密歇根大學的Muneesh Tewari教授認為：“不同的人采用不同的方法來測序小RNA，有時會得到不同的結果。如果照這樣子發展下去，這個領域很難進步。”

　　于是，Tewari實驗室召集了美國和荷蘭的九個實驗室，希望解決這個問題。這個聯盟測試了九種不同的RNA測序方法，以確定測序小RNA的最佳方法。他們的目標是建立一個標準化的實驗方案，讓不同實驗室的結果可以比較。這項研究成果于本周發表在《Nature Biotechnology》上。

　　新興的液體活檢技術在很大程度上依賴于小RNA的測序，如microRNA。這些小小的片段在癌癥等疾病狀態下會發生改變，從而有助于人們在最早期階段檢測疾病。不過，血液或尿液都只含有微量的游離RNA，讓測序難以進行。

　　“對診斷學而言，液體活檢無疑是一個激動人心的新領域。不過，它也需要我們這樣的聯盟，因為不同方法往往會帶來無法重復的結果，”Tewari談道。他還指出，這項工作集合了各個領域的專家，從分子生物學家到生物信息學專家。

　　在這項研究中，研究人員以同樣的手段制備樣本，并將它們送往九個實驗室進行分析。每個實驗室采用各自的方法測序四個樣本，包括一個血漿樣本和三個合成RNA樣本。

　　他們總共測試了九種不同的實驗方案，包括三種商業化的文庫制備方法，其接頭帶有確定序列，以及六種由實驗室開發的方案，其接頭帶有簡并堿基。他們共產生了50億條測序序列。

　　這篇論文的第一作者、Tewari實驗室的博士后研究員Maria D. Giraldez表示：“我們意識到，不僅不同的方法產生了不同的結果，即使是同一方法的小小改變，也引入了明顯的變化。若要比較不同實驗室的結果，最好使用高度標準化的實驗方案。”

　　研究人員發現，在評估各個標志物的豐度時，不同的文庫制備方法產生了不同的結果，往往也不太準確。不過聯盟實驗室開發的文庫制備方法提高了結果的準確性。在利用RNA測序來比較不同樣品的microRNA相對量時，各個實驗室都產生了準確而重復的結果。

　　“我們發現，如果各個實驗室都采用相同的實驗方案，那么結果變化不大，”另一名作者Ryan Spengler談道。“這意味著，如果你想要協調不同實驗室的研究，關鍵是采用相同的實驗方案，無論它是什么。然后你才能比較結果。”

　　這項分析為研究人員建立標準的實驗方案奠定基礎，并推動RNA測序和液體活檢向前發展。研究人員目前向公眾提供合成的參考材料，這意味著各地的研究人員都能運行檢測，并將結果與實驗室聯盟的結果進行比較。