微生物與免疫學表面抗原實驗報告

細胞表面抗原檢測實驗
實驗原理
用人結腸癌細胞為免疫原，免疫小鼠，制得鼠抗人結腸癌細胞表面抗原（Ag）的單克隆抗體 IgG（第一抗體），二者可以發生特異性的抗原抗體反應，形成抗原抗體復合物，再加入市售（也可自制）的熒光標記的羊抗鼠IgG抗體（第二抗體），可以與復合物進一步發生抗原抗體反應（二次抗體反應），這樣就可以在光顯微鏡下觀察到這種抗原在結腸癌細胞表面的存在。
實驗材料
HeLa細胞
試劑/試劑盒
1640培養液 小牛血清 甲醛固定液 PBS 液體石蠟
儀器/耗材
蓋片 載片 培養瓶 培養皿 濾紙 鑷子 吸管 倒置顯微鏡 熒光顯微鏡 微量加樣器
實驗步驟
1. 將培養瓶中的結腸癌細胞接種到裝有蓋片的培養皿中，培養2~3天。

2. 在倒置鏡下觀察到蓋片上的細胞生長狀態良好后，在蓋片左上角用玻璃筆做一下標記，以免在以后的操作中正反面顛倒。

3. 將蓋片放在甲醛固定液中，4℃固定5~10分鐘。

4. 用PBS洗三次，注意不要將PBS液直接倒在蓋片的細胞面，以免引起細胞大量丟失。用濾紙片將蓋片上的PBS輕輕吸干，不要損傷細胞層。

5. 將已稀釋好的小鼠抗體滴在蓋片上．每個蓋片50 μl，37℃溫育30分鐘。

6. 用PBS洗三次，濾紙吸干。

7. 將已稀釋好的熒光標記羊抗鼠二次抗體5μl滴加在蓋片上，37℃溫育30分鐘。

8. 用PBS洗三次，濾紙吸干。

9. 將載片上滴一滴液體石蠟。然后將蓋片細胞面朝下放到載玻片上，在熒光顯微鏡下觀察。