實驗方法原理 細胞培養中用抗生素是殺滅微生物的主要手段;但迄今尚無對抗支原體特效抗生素。
各種抗生素性的性質不同,聯合應用比單用效果好;一般在已發生微生物污染后,再使用抗生素,常難以根除.預防性應用比污染后使用更好。有時抗生素僅對細菌有抑制作用,而無殺滅效應;反復使用抗生索還能使微生物產生抗藥性,且對細胞本身也有一定影響,因此有有主張盡量不用抗生素。當然在一些有價值的細胞,仍需用抗生素挽救,在這種情況下,可采用比常用量大5~10 倍的沖擊法,加藥后作用24~48 小時,再換入常規培養液中,有時可能奏效。
實驗材料 細胞
試劑、試劑盒 CipBM-2BM—1PBS
儀器、耗材 顯微鏡
實驗步驟
最近報道應用以 4-氟,2-羥基喹啉(Ciprofloxacin:Cip)、截耳素衍生物(Pleu—romutilinDeriyative:BM—Cyclin2:BM—1)和四環素衍生物(BM-2)等三種抗生京抑制支原體效果很好,這三種抗生京單用或合用都能有效地殺滅支原體,其法如下(以BM-1和MB-2 為例)
1. 抗生素制備
均可用PBS配成250×濃縮液-20 ℃備用;
2. 處理
取受支原體污染的細胞,吸除培養液,加入含BM-1的1640培養液培養3 天后,吸除培養液,再加入含BM-2 的1640培養液培養4 天,如此連續三個輪回;
3. 檢測
用33258 熒光染色鏡檢(每個輪回末應檢測一次);
4. 培養
清除支原體后的細胞,在不加上述抗生素的培養液中,再培養傳代3~4 次;
5. 鏡檢
如清除不徹底可再進行處理至純凈為止(一般3 個輪回即能被完全消除)。BM-1 和BM-2 與CIP 聯合應用亦可,即先用含BIP培養液培養12 天后,再按上述方法處理。