實驗方法原理 以高濃度接種細胞和微珠,然后按照要求進行稀釋、攪拌和取樣。
實驗材料 起始培養物
儀器、耗材 生長培養基微載體攪拌培養瓶磁力攪拌器
實驗步驟
1. 按照所需最終培養液量的 1/3,以 2~3 g/L 混懸微珠。
2. 用胰蛋白酶消化和計數細胞,以正常接種濃度的 3~5 倍將細胞接種到微珠懸液中。
3. 以 10~25 rpm 將培養物攪拌 8 h。
4. 加入培養液,達到 0.7~1 g/L 的微珠濃度的最終容量。
5. 加快攪拌速度至 60 rpm。
6. 如果 pH 下降,關閉攪拌器培養 5 min,使微珠沉降下來,然后更換 1/2~2/3 的培養液。
7. 收集細胞:
(a)吸出培養液。
(b)通過沉降法清洗細胞。
(c)用胰蛋白酶和 EDTA 處理微珠。
(d)讓微珠沉降。
(e)通過轉動使細胞從微珠上脫落下來。
(f)通過混懸和離心清洗細胞。