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  • 發布時間:2020-08-17 22:28 原文鏈接: 微載體實驗

    實驗方法原理 以高濃度接種細胞和微珠,然后按照要求進行稀釋、攪拌和取樣。

    實驗材料 起始培養物

    儀器、耗材 生長培養基微載體攪拌培養瓶磁力攪拌器

    實驗步驟

    1. 按照所需最終培養液量的 1/3,以 2~3 g/L 混懸微珠。

    2. 用胰蛋白酶消化和計數細胞,以正常接種濃度的 3~5 倍將細胞接種到微珠懸液中。

    3. 以 10~25 rpm 將培養物攪拌 8 h。

    4. 加入培養液,達到 0.7~1 g/L 的微珠濃度的最終容量。

    5. 加快攪拌速度至 60 rpm。

    6. 如果 pH 下降,關閉攪拌器培養 5 min,使微珠沉降下來,然后更換 1/2~2/3 的培養液。

    7. 收集細胞:

    (a)吸出培養液。

    (b)通過沉降法清洗細胞。

    (c)用胰蛋白酶和 EDTA 處理微珠。

    (d)讓微珠沉降。

    (e)通過轉動使細胞從微珠上脫落下來。

    (f)通過混懸和離心清洗細胞。


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