同型對照(Isotype Control):使用與一抗相同種屬來源、相同亞型、相同劑量和相同的免疫球蛋白及亞型的免疫球蛋白,用于消除由于抗體非特異性結合到細胞表面而產生的背景染色。如果一抗是多抗,可以用an normal serum(與一抗相同的正常血清) (must be the same species as primary antibody)。This control is easy to achieve and can be used routinely in immunohistochemical staining.這個可以咨詢試劑商。同型對照為免疫熒光標記中的陰性對照。由于熒光標記單抗的組來源不同,應選用相同來源的未標記單抗作為同型對照來調整背景染色。
舉個例子:比如檢測一抗為單抗的mouse anti rat CD11b,clone OX-42 purified IgG,那么它的isotype 是mouse IgG2a, 所以可以用purified(純化的) mouse IgG2a來做OX-42的同型對照(Isotype Control)。一般的的生物技術公司和國內的代理都有出售。
同型對照:是指與MoAb相同的、未免疫小鼠的免疫球蛋白亞類,若使用直接免疫熒光染色法,同型對照也應標記熒光色素,如IgG1 FITC、IgG2a、PE等。主要考慮了細胞的自發熒光、FC受體介導的抗體結合和非特異性抗體結合等影響因素。此外,同型對照與MoAb所標記的熒光色素、濃度、F:P比值(標記的熒光色素與免疫球蛋白分子的比值)應該相同為最佳,這對準確設定陰性與陽性細胞的界標有重要意義,切忌使用與MoAb不相匹配的同型對照,最好為同一實驗室、采用相同工藝或方法制備(如同一品牌)的產品。
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