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  • 發布時間:2021-11-25 14:49 原文鏈接: 懸浮培養法細胞的篩選馴化和保藏

    實現懸浮培養首先需要選擇合適的宿主細胞,細胞系的特征直接影響放大的可能性以及放大技術的選擇。同一種細胞在懸浮培養和貼罐培養時對同一病毒的敏感性不同;同一株細胞不同的克隆對營養條件有不同的需求,對病毒敏感性亦可能不同。 常根據毒株特性,綜合考慮所用毒株能在何種細胞上增殖、表達,懸浮或貼壁細胞屬性足否適合大規模培養,規模和技術是否影響表達的穩定性,能否進行馴化,馴化后毒株的敏感性和表達量是否有變化等因素選擇合適的宿主細胞。

    細胞篩選馴化的實質是應用現代細胞生物學技術,在降低細胞凋亡率、提高細胞活力、延長細胞生命周期、提高產物濃度等方面進行研究,結合特定細胞的營養需求進行培養基優化,篩選適用于生產的細胞株。

    為實現馴化的穩定,通常由高密度細胞培養轉向低密度細胞培養,由高濃度血清培養逐漸降低血清濃度進行培養。因細胞損傷后難以修復,所以馴化時細胞活力應保持在90%以上。細胞的增殖能力直接影響產能,馴化時應保持對其增殖能力的測定。細胞馴化時還應對其表達分泌能力進行測定,避免馴化后的細胞表達特性發生變化。馴化后細胞的增殖能力、活力及生產能力要能夠滿足工業大規模生產的需要。由于特定細胞的營養需求不同,實現其馴化的難易程度也不同,在馴化時需要選用合適的細胞培養基,有針對性地補充某些營養成分以滿足細胞的特定需求,使馴化好的細胞可以保持其懸浮或是無血清生長的特性。與20世紀80年代相比,由于細胞培養基技術的發展,細胞馴化變得相對容易。

    在篩選馴化過程中應注意及時對細胞進行保藏,以避免在培養過程中出現異常情況導致篩選馴化工作量的重復和時間浪費。

    保藏時,應選用在該馴化條件下細胞狀態良好的細胞。


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