在5月30日尚恩生物直播課程中，劉老師通過專業的講解，讓大家詳細了解了懸浮細胞系通用培養指南相關內容。直播課件請點擊尚恩公眾號—回復關鍵詞“直播課件”領取。
直播過程中不僅收獲了大家的滿滿熱情～也收到大家不少的提問，對于大家的疑問小尚這邊都有認真整理，讓劉老師做了詳細解答，如果大家還有其他疑問的也可以在評論區留言哦！
1. 老師好，我養 THP1 細胞出現很多貼壁的情況，需要消化下來嗎?
貼壁細胞不需要消化下來，可將懸浮細胞轉移至新瓶中培養，舍棄貼壁的細胞。如果貼壁細胞特別多，需要檢查培養基成分是否有誤，血清質量是否不佳，培養器皿材質不適合，或者存在細胞交叉污染等異常情況。
2. 計數儀直徑一般設置多少?
一般哺乳動物細胞直徑在20um左右，需根據成像具體情況調整直徑范圍。
3. HL60 用什么凍存液，無血清凍存液會導致分化嗎？
可以用92%完全培養基+8%DMSO、92%胎牛血清+8%DMSO、無血清非程序凍存液。HL60的分化主要和DMSO有關，和有無血清關系不大，凍存過程中一般不會刺激HL60分化，但復蘇的時候需注意細胞融解后立即離心去除DMSO。
4. 老師我細胞總是復蘇不起來什么原因？
復蘇不起來原因很多，凍存前細胞狀態不好，凍存密度過低，凍存條件不當，凍存和復蘇過程中操作不當等等原因都可能導致復蘇不起來，需要結合以上各方面排查原因。
5. 細胞背景里面總有黑點在動是污染了嗎？
如果黑點大小形態不一，緩慢飄動，則是細胞碎片；如果黑點快速震動、原地打轉或快速游動，則懷疑細菌污染。
6. 懸浮細胞正常形態是圓的嗎？我的長的特別慢，高倍鏡下還不圓。
有的懸浮細胞正常形態并不規則，可能呈橢圓形或多邊形，可以結合ATCC等國際細胞庫的照片來判斷。若正常情況下應該是圓形的細胞變得不圓了，考慮細胞是否受到了較為劇烈的環境變化（運輸震蕩或更換了培養基配方、血清品牌）。細胞生長太慢，同時密度很低的情況下，需要離心并用更少的培養基重懸培養細胞，人為增加細胞密度來促進生長。另外，可多加血清促進細胞生長，注意血清最高比例不要超過20%。
7. 黑膠蟲與細胞碎片怎么區別，有沒有簡單的判別方法
肉眼觀察，細胞碎片大小不一，不會動或僅僅是緩慢飄動，少量細胞碎片對細胞狀態沒有影響。黑膠蟲污染細胞一般有以下特點：1.污染前期無明顯異常，隨著培養可以明顯發現細胞間隙有很多黑色顆粒甚至遮蔽細胞，并有可能伴隨類似布朗運動的現象，培養基不會渾濁；2.細胞培養基消耗比較快，pH下降很快，需要經常換液；3.培養的細胞狀態會變差甚至死亡；4.普通雙抗對抑制黑膠蟲無效。
8. 老師為什么我們培養瓶里的細胞會長的不均勻啊-邊多一邊少這個會有影響嗎？
懸浮細胞培養一般都是均勻的，貼壁細胞生長不均勻可能是接種的時候沒有搖勻或搖勻次數太多（具體原因可參考推文《百問百答 | 細胞貼壁不均勻是怎么回事？》。細胞生長不均勻對細胞影響不大，多養幾天等細胞總體密度起來后重新消化接種即可，接種的時候注意十字法搖勻5-6次即可。
9. 血清多還是少了會容易聚團呢
細胞聚團和血清的量沒有必然關系，通常和血清質量或品牌有關。
10. 瓶子可以重復利用嗎？
懸浮細胞培養用的瓶子可以重復利用。但發現貼壁細胞增多要及時換瓶。
11. 懸浮細胞用不含有TC處理的培養瓶是不是更好？
理論上是的。但TC處理的培養瓶也可以養懸浮細胞，一般不會造成細胞異常貼壁。
12.培養基半天就發黃了，這正常嗎，也是2-3天半換液一次嗎？
排除污染的情況，細胞半天發黃也是正常的，細胞代謝過程中會產酸導致培養基ph降低而變黃。如果細胞量過多、細胞代謝活性強或培養基加的太少，都會導致培養基很快變黃。培養基變黃后要盡快換液，避免營養不足影響細胞狀態。