幾個小技巧:
1:在做多個同類酶切反應預混液時,水要多加1-5微升(當然不能超過預混液總體積的5%),以防止最后一管酶液不夠的尷尬局面.
2:記住所用酶的特性,不光體現BUFFER的選擇上。也體現記住不同限制酶穩定性上。比如BamHI5小時內穩定(37度),而BglII16小時內都保留100%的活性;那么在用酶時,如果能反應16小時,就可以采用BamHI : BglII = 2:1的用量了(為了省錢).
3:如果反應較長時間而酶切體系又很小比如10微升,那么哪怕用PCR小管做反應,體積損失也會很大。我采用石蠟油覆蓋的方法避免水分損失甘油濃度提高而引起的星活性