技術和方案26小量提取E.coliDNA

Terrific broth

1.將單菌落接種于 3 ml 含有 100 ug/ml 氨節青霉素的 Terrific broth 培養基中，37°C 培養過夜。

2.取 1.5 ml 細胞懸液于微量離心管中，13000 r/min 離心 1min，棄去上清。

3.加入 100 ul 溶液 1[50 mmol/L 葡萄糖/10 mmol/LEDTA/25 mmol/L Tris(pH8.0)]，用移液器吸頭攪松菌塊，使管底一側的細胞脫落下來，用旋渦振蕩器完全懸浮細胞。

4.加入 200ul 溶液 2(0.2mol/L NaOH/l%SDS)，顛倒微量離心管 4 次混勻。冰浴 5 min。

5.加入 150ul 溶液 3(3mol/L 鉀鹽/5mol/L 乙酸鹽），上下輕搖管子 4 次混勻。冰浴 5 min。

6.13000r/min 離心 5 min。

7.將上清倒人一個裝有 500ul 苯酚的離心管中，旋渦振蕩器充分混合，13000r/mm 離心 5 min。

8.取 300ul 上清移入一個潔凈離心管，加入 750ul 100% 乙醇，振勻，室溫放置 2 min。

9.13000r/min 離心 5 min 沉淀 DNA。倒去上清，倒扣于紙巾上約 5 min 排干液體。

10.以 50ul 溶液 4[TE (pH8.0)+10ug/ml RNase A] 懸浮 DNA 沉淀。