鑒別
(1)取本品與胰蛋白酶,分別加水溶解并稀釋制成每1ml中含1mg的溶液,各取10p1置點滴板上,混勻后,加對甲苯磺酰L精氨酸甲酯鹽酸鹽試液0.2ml,放置數分鐘后,應不顯紫紅色。以胰蛋白酶溶液10山作對照,同法操作,應顯紫紅色。(2)在N-焦谷氨酰-抑肽酶和有關物質項下記錄的色譜圖中,供試品溶液主峰的保留時間應與對照品溶液主峰的保留時間一致。
檢查
吸光度取本品,精密稱定,加水溶解并定量稀釋制成每1ml中含3.0單位的溶液,照紫外可見分光光度法(通則0401)測定,在277nm的波長處有最大吸收,吸光度不得過0.8。酸度取本品,加水溶解并稀釋制成每1m中含5mg溶液,依法測定(通則0631),pH值應為5.0~7.0溶液的澄清度取本品,加水溶解并稀釋制成每1ml中含2ng的溶液,依法檢查(通則0902第一法),溶液應澄清高分子蛋白質照分子排阻色譜法(通則0514)測定供試品溶液取本品,加水溶解并定量稀釋制成每1ml中含5單位的溶液。系統適用性溶液取經112℃加熱2小時處理過的抑肽酶適量,加水溶解并稀釋制成每1ml中含5單位的溶液。色譜條件以親水的改性硅膠為填充劑G400WXL柱,7,8mm×300mm,8m或其他適宜的色譜柱),用3根色譜柱串聯;以3mol/L醋酸溶液為流動相;流速為每分鐘1.0ml;檢測波長為28nm;柱溫為35℃;進樣體積100l。系統適用性要求系統適用性溶液色譜圖中,二聚體峰相對抑肽酶峰的保留時間約為θ.9;二聚體峰與抑肽酶峰間的分離度應大于1.0;抑肽酶主峰的拖尾因子不得大于2.5。測定法精密量取供試品溶液,注入液相色譜儀,記錄色譜圖。限度供試品溶液色譜圖中,保留時間小于抑肽酶主峰的均為高分子蛋白質峰,按峰面積歸一化法計算,高分子蛋白質的總量不得大于1.0%。去丙氨酸-去甘氨酸-抑肽酶和去丙氨酸-抑肽酶照毛細管電泳法(通則0542)測定。供試品溶液取本品適量,加水溶解并定量稀釋制成每1ml中約含5單位的溶液。對照品溶液取抑肽酶對照品,加水溶解并定量稀釋制成每1m中約含5單位的溶液電泳條件用熔融石英毛細管為分離柱(75μm×600m有效長度500mm);以120mmol/L磷酸二氫鉀緩沖液(pH2.5)為操作緩沖液;檢測波長為214nm;毛細管溫度為30℃;操作電壓為12kV。進樣端為正極,1.5kPa壓力進樣,進樣時間為3秒。每次進樣前,依次用0.1mol/L氫氧化鈉溶液、去離子水和操作緩沖液清洗毛細管柱2、2和5分鐘系統適用性要求對照品溶液電泳圖中,去丙氨酸-去甘氨酸-抑肽酶峰相對抑肽酶峰的遷移時間為0.98,去丙氨酸-抑肽酶峰相對抑肽酶峰的遷移時間為0.99;去丙氨酸-去甘氨酸-抑肽酶峰與去丙氨酸-抑肽酶峰間的分離度應大于0.8,去丙氨酸-抑肽酶峰與抑肽酶峰間的分離度應大于0.5。抑肽酶峰的拖尾因子不得大于3測定法取供試品溶液進樣,記錄電泳圖限度按公式100(r;/r)計算,其中r為去丙氨酸-去甘氨酸-抑肽酶或去丙氨酸-抑肽酶的校正峰面積(峰面積/遷移時間),rs為去丙氨酸-去甘氨酸-抑肽酶、去丙氨酸-抑肽酶與抑肽酶的校正峰面積總和。去丙氨酸-去甘氨酸-抑肽酶的量不得大于8.0%,去丙氨酸抑肽酶的量不得大于7.5%N-焦谷氨酰抑肽酶和有關物質照高效液相色譜法(通則0512)測定供試品溶液取本品適量,加流動相A溶解并稀釋制成每1ml中約含5單位的溶液對照品溶液取抑肽酶對照品,加流動相A溶解并稀釋制成每1ml中約含5單位的溶液。色譜條件用陽離子色譜柱( TSK-GEL IC-Cation-SW柱,7.8mm×750mm,10m或其他適宜的色譜柱);以磷酸鹽緩沖液(取磷酸二氫鉀3.52g、磷酸氫二鈉7.26g,加水1000ml使溶解)為流動相A,以磷酸鹽-硫酸銨緩沖液(取磷酸二氫鉀3.52g、磷酸氫二鈉7.26g、硫酸銨66.07g,加水1000ml使溶解)為流動相B,按下表進行梯度洗脫;流速為每分鐘1.0ml;檢測波長為210nm;柱溫為40℃;進樣體積40l時間(分鐘)流動相A(%)流動相B(%)72系統適用性要求對照品溶液色譜圖中,抑肽酶峰的保留時間為17~20分鐘;N-焦谷氨酰-抑肽酶峰相對抑肽酶峰的保留時間為0.9;N-焦谷氨酰-抑肽酶峰與抑肽酶峰間的分離度應大于1.0;抑肽酶峰的拖尾因子應大于2. 測定法精密量取供試品溶液,注人液相色譜儀,記錄色譜圖。限度按峰面積歸一化法計算,N-焦谷氨酰-抑肽酶的峰面積不得大于1.0%;單個未知雜質的峰面積不得大于0.5%,未知雜質峰面積的和不得大于1.0%水分取本品,照水分測定法(通則0832第一法1)測定,含水分不得過6.0%熱原取本品,加滅菌注射用水溶解并稀釋制成每1ml中含15單位的溶液,依法檢查(通則1142),劑量按家兔體重每1kg注射1ml,應符合規定異常毒性取本品,加氯化鈉注射液溶解并稀釋制成每1ml中含4單位的溶液,依法檢查(通則1141),應符合規定降壓物質取本品,加氯化鈉注射液溶解并稀釋,依法檢查(通則1145),劑量按貓體重每1kg注射1.5單位,應符合規定。