用Trizol來提取細胞總RNA的話,一個6孔板的細胞足夠了。對于貼壁培養的細胞,可將培養基吸出后直接向培養板中加入Trizol來溶解細胞,然后分次移出細胞裂解物進行后續操作即可。值得注意的是,對于所加Trizol的量,是依據培養板的面積而不是依據細胞的數量來決定用量的(一般每10cm2加1
ml)。當Trizol量不足時可導致抽提的RNA中污染有DNA。
另外,在Trizol的使用說明中的注意事項提及,如果細胞量太少(100~10000個細胞),可加入800
ul的Trizol,后續裂解、加氯仿按常規操作。在用異丙醇沉淀RNA前加入5-10
ug無RNA酶的糖原作為水相的載體。其會保留在水相,與RNA共沉淀,且不影響后續的逆轉錄及PCR反應。
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