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  • 發布時間:2022-03-17 16:08 原文鏈接: 支氣管肺泡灌洗術(bal)的注意事項及檢查過程

      注意事項

      1、嚴格掌握適應證,年老、體衰患者檢查中應以心電圖及經皮檢測血氧飽和度進行監護。術中給予鼻導管吸氧或高頻通氣供氧。

      2、術中嚴格無菌操作,防止繼發感染。

      3、按要求正規操作,合格的灌洗液應達到規定的回收量,不混有血液(紅細胞數<10%),不應混有多量上皮細胞(<3%)。

      4、獲得灌洗液后盡早送檢。

      5、檢查后出現發熱、出血、肺部感染、支氣管痙攣等并發癥時,作相應處理。

      檢查過程

      檢查操作

      1、術前3-4h禁食。術前30min肌注地西泮(安定)10mg及阿托品0.5mg。

      2、2%利多卡因鼻腔、氣道局部粘膜麻醉。

      3、纖維支氣管鏡經鼻腔插入氣管,嵌入右肺中葉或左肺舌葉段支氣管管口(局限性肺病變應選相應支氣管肺泡段),注入2%利多卡因2-3ml局麻后,用50ml注射器將37℃生理鹽水分次注入,每次25-50ml總量100-300ml,注入后立即通過負壓吸引裝置吸引、回收至硅質灌洗液收集瓶內。一般回收液量應達注入液量的40%-60%。

      4、回收液用雙層無菌紗布過濾,除去粘液,記錄總回收液量,裝入硅質容器中,置于冰水(-4℃)中送檢驗室,應在2-3h內對灌洗液進行檢查、分析。

      支氣管肺泡灌洗術細胞學檢查方法

      (1)BALF細胞總數和分類計數檢測

      ①將上述回收灌洗液裝入塑料離心管內以1200r/min,在4℃下離心10min,上清(原液或10倍濃縮)-70℃儲存,用做可溶性成分的檢測。

      ②經離心沉淀的細胞成分用Hank液(不含Ca2+、Mg2+)在同樣條件離心沖洗2次,每次5min。棄去上清后加Hank液3~5ml制成細胞懸液。也可以用灌洗液原液減少細胞丟失。

      ③然后在改良的Neubauer計數臺上計數BALF中細胞總數,一般以1×106/ml表示。如果細胞數過高時,再用Hank液稀釋,調整細胞數為5×106/ml,并同時將試管浸入碎冰塊中備用。

      ④細胞分類計數,采用細胞離心涂片裝置,加入備用細胞懸液(細胞濃度為5×106個/ml)100μl,在4℃下以1200r/min離心10min,通過離心作用將一定數量的BALF細胞直接平鋪于鹽載玻片上。取下載玻片立即用冷風吹干,置于無水乙醇中固定30min后進行染色,一般用Wright或HE染色。

      ⑤在40倍光學顯微鏡下計數200個細胞,進行細胞分類計數。

      (2)BALF中T淋巴細胞亞群的檢測

      ①采用間接免疫熒光法,將上述獲得的BALF細胞成分,用10%小牛血清RPMI 1640培養液3~5ml制成細胞懸液。

      ②將細胞懸液倒入平皿中,置于5% CO2 37℃培養箱中孵育2h,進行貼壁處理,去除肺泡巨噬細胞。

      ③取出細胞懸液,再用Hank液沖洗離心1次,棄上清留20~100μl。經貼壁處理后的細胞懸液中,肺泡巨噬細胞顯著減少,淋巴細胞相對增多。

      ④將經貼壁處理的細胞懸液分裝3個小錐形離心管內,每管20~30μl,用微量加樣器向標本中加單克隆抗體CD3、CD4和CD8各20~40μl,混勻置于4℃冰箱中作用1~2h。

      ⑤取出標本,先用Hank液沖洗離心2次,以12000r/min離心20s,然后加羊抗鼠熒光抗體各20~40μl,置于冰箱作用30min。

      ⑥取現標本用Hank液以同樣速度和時間離心沖洗2次,棄上清留20μl充分混勻細胞,取1滴于載玻片上加蓋玻片。熒光顯微鏡下數200個淋巴細胞并計算出標有熒光的細胞陽性率。

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