按其方法學原理,主要有兩種基本類型。
1、放射免疫分析(RIA)
RIA 是該類技術最經典的模式。它是以放射核素標記抗原與反應系統中未標記的抗原競爭特異性抗體的基本原理來測定待檢樣品中抗原量的一種分析法。使放射性標記抗原和未標記抗原(待測物)與不足量的特異性抗體競爭性地結合,反應后分離并測量放射性而求得未標記抗原的量。由于 RIA 是以放射性標記與非標記抗原競爭性地與抗體結合為理論基礎,故又稱為競爭性放射飽和分析法。其中又分為單層競爭法與雙層競爭法。
(1)單層競爭法:預先將抗體連接到載體上,加入標記抗原(*Ag)和待檢抗原(Ag)時,二者競爭性地與固相載體結合。若固相載體和標記抗原的量不變,則加入待檢抗原的量越多,B/F 值越小,根據這種函數關系,繪制標準曲線。
(2)雙層競爭法:將抗原與載體結合,然后加入抗體與抗原結合,載體上的放射量與待測濃度成反比。此方法繁雜,且有時重復性差。
2、免疫放射分析(IRMA)
用放射性核素標記的過量抗體非競爭結合抗原,經固相分離,測定待測樣品中抗原量的一種方案。
免疫放射分析是從放射免疫分析的基礎上發展起來的核素標記免疫測定,其特點為用核素標記的抗體直接與受檢抗原反應并用固相免疫吸附劑作為 B 或 F 的分離手段。IRMA 于1968年由 Miles 和 Heles 改進為雙位免疫結合,在免疫檢驗中取得了廣泛應用。IRMA 屬固相免疫標記測定,其原理與 ELISA 極為相似,不同點主要為標記物為核素及最后檢測的為放射性量。單位點IRMA的反應模式如圖1-1所示。
圖1-1 單位點IRMA的反應模式示意圖
抗原與過量的標記抗體在液相反應后加入免疫吸附劑,即結合在纖維素粉或其他顆粒載體上的抗原。游離的標記抗體與免疫吸附劑結合被離心除去,然后測定上清液的放射性量。雙位點 IRMA 的反應模式如圖1-2所示。
圖1-2 雙位點IRMA的反應模式示意圖
受檢抗原與固相抗體結合后,洗滌,加核素標記的抗體,反應后洗滌除去游離的標記抗體,測量固相上的放射性量。不論是單位點還是雙位點 IRMA,最后測得的放射性與受檢抗原的量成正比。