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  • 發布時間:2019-05-28 15:41 原文鏈接: 新型隱球菌性腦膜腦炎診斷方法

    新型隱球菌性腦膜炎/腦炎是由新型隱球菌侵入所引起的感染性疾病,是中樞神經系統真菌感染中最常見的一種。新型隱球菌有三個變種,即新生變種、格特變種和上海變種。人體的肺、皮膚等部位感染新型隱球菌后,可以向中樞神經系統播散,但多數新型隱球菌性腦膜炎/腦炎患者并不伴有外周的新型隱球菌感染。新型隱球菌是機會致病菌,在免疫功能低下(如長時間使用廣譜抗菌素、糖皮質激素、免疫抑制劑等藥物和艾滋病等)患者,新型隱球菌性腦膜炎/腦炎的發病率顯著升高。起病隱襲、病程進展快、臨床表現和影像學均無特異性是新型隱球菌性腦膜炎/腦炎的特點,因此,腦脊液的病原學檢查就顯得尤為重要。
       目前,新型隱球菌的實驗室檢查方法很多,但主要的有以下幾種。
      1.新型隱球菌培養為診斷的金標準,并可鑒定新型隱球菌的類型,但培養所需時間較長。
      2.墨汁染色(負染色法)其是根據背景著色而菌體本身不著色的原理來襯染莢膜,方法簡單快速,為診斷的金標準,但檢出率會隨著莢膜的破裂而下降。此外,新型隱球菌數量較少和檢驗人員的識別經驗不足(如將隱球菌判斷為氣泡和白細胞,或將氣泡和白細胞等誤認為隱球菌),也會影響墨汁染色的結果,造成假陰性或假陽性。
     


      3.腦脊液細胞學檢查方法快速簡便,為診斷的金標準,不僅可以通過細胞分類來評估患者的免疫狀態和治療效果,而且未治療患者的腦脊液經細胞玻片離心沉淀儀制片和瑞氏-吉姆薩(MGG)染色后,極易查見新型隱球菌。光鏡下,MGG染色的新型隱球菌菌體深藍、圓形(直徑5~15μm)、常成簇排列、無核、莢膜可呈輻射狀,部分菌體可見出芽。


      經MGG染色的新型隱球菌著色不受莢膜破裂的影響,且形態特殊,易于辨認,不易漏診。而將腦脊液中的有形物采用離心沉淀法收集,也極大地提高了新型隱球菌的陽性檢出率。樊新紅等發現,腦脊液細胞學檢查首次腰穿新型隱球菌檢出率為95.8%,顯著高于墨汁染色的68.8%。
      4.阿利新蘭染色方法簡便快速,為診斷的金標準。但因同為襯染莢膜的染色, 莢膜破裂會造成陽性檢出率的下降。

      5. 新型隱球菌菌體計數(血球計數板)法 快速簡便,為診斷的金標準。但有時菌體難與白細胞區分,辨認較困難。
      6. 新型隱球菌莢膜多糖體抗原檢測  快速簡便,敏感性和特異性高,但不能作為診斷的金標準。目前多采用乳膠凝集試驗和膠體金法。
        7. PCR技術 相對于上述幾種檢測方法,PCR技術成本昂貴,操作復雜,并無優勢可言。
      8. 基因組學方法 敏感性高,特異性強。腦脊液培養、墨汁染色、MGG染色、阿利新蘭染色和新型隱球菌菌體計數雖為診斷的金標準,但當病原體數量極少時,皆可呈陰性,且除腦脊液培養外,其余方法均不能鑒別新型隱球菌的類型。新型隱球菌類型的鑒定對于臨床治療具有指導意義。使用二代測序技術(Next Generation Sequencing,NGS)檢測腦脊液中的新型隱球菌,不僅可以檢測出極微量的病原體,提高檢出率,而且還可以進行相關分型,對于新型隱球菌腦膜炎/腦炎早期診斷和治療都具有十分重要的臨床意義。

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