新生大鼠心肌細胞原代培養實驗（一）

SD 乳鼠

低糖 DMEM、胰酶 EDTA 青鏈霉素 碳酸氫鈉液 新生牛血清 谷氨酰胺 D-Hank's 液 新潔爾滅 碘酒 酒精

鋁盒 眼科直剪 眼科彎剪 眼科直鑷 眼科彎剪 玻璃培養皿 廣口瓶 棉球 燒杯 錐形瓶 離心管 磁力攪拌器 攪拌子 水浴振蕩器 尼龍篩網 針式濾器

一、實驗材料準備 
 

1.  動物
 

出生后 1-4 天 SD 乳鼠 15 只。

2.   試劑
 

低糖 DMEM、胰酶(含 EDTA)、青鏈霉素、碳酸氫鈉液、新生牛血清、谷氨酰胺、D-Hank's 液。0.1%新潔爾滅、碘酒、75%酒精，培養液(DMEM，新生牛血清，青鏈霉素)。

3.   手術器械和儀器
 

鋁盒、眼科直剪、眼科彎剪、眼科直鑷、眼科彎剪、玻璃培養皿(共 2 套，一套用于解剖取材，另一套用于剪碎心臟組織)、100 ml 廣口瓶兩個(分別裝碘酒和酒精棉球)、500 ml 燒杯、250 ml 錐形瓶、15 ml和 50 ml 的離心管，磁力攪拌器和攪拌子(或者水浴振蕩器)、150-200 目尼龍篩網和針式濾器。

二、方法
 

1.   將胰酶用 D-Hank's 液配成 0.06%的濃度，并放置于 37℃水浴中溫育好。

2.  解剖取材：將乳鼠放入 0.1%新潔爾滅浸泡一下后拿出，用另一把大鑷子取碘酒棉球擦皮膚，再用酒精棉球脫碘。左手捏緊乳鼠頸背部皮膚以充分展露胸部，右手取一把眼科直剪剪開皮，充分撕拉開，再用酒精棉球消毒后，取一把眼科彎剪沿胸骨柄左下緣向上剪開肋骨，然后在切口中間橫剪胸骨。這樣只要左手稍頂，乳鼠的心臟就直接跳出來。然后用眼科彎鑷從心臟中部直接將心室部分剪下，放入冰浴的 D-Hank's 液中。重復以上過程。取材完畢后，撤掉取材的手術器械。

注：為了保證心肌細胞的活力，取心的操作過程盡量快，另外，最好把盛的心臟的培養皿放置在冰臺上或者預冷的平衡鹽液中。