實驗方法原理 對實體組織分散的作用原理主要有3個方面:① 可以破壞組織間的膠原纖維、彈性纖維等;② 可以水解組織間的黏多糖等物質;③ 可以水解組織細胞間的緊密聯結裝置的蛋白質物質。
實驗材料 組織酶
儀器、耗材 試管離心管尼龍網
實驗步驟
1. 將適合于酶消化的組織置于離心管中。
2. 將選好的酶溶掖 1~2 ml 加入盛有被消化組織的試管中。
3. 一般消化 20~30 min ( 恒溫 37℃ 或室溫),消化期間要間斷振蕩或吹打。
4. 終止消化,收集細胞懸液,以 300 日尼龍網過濾,除去細胞團塊,以低速離心除去細胞部片。
5. 將制備好的單細胞懸液進行熒光染色后上機檢測,或保存備用。
注意事項
1. 酶需要溶解于適當的酶液中,而這些溶液不至于造成酶效價降低。
2. 要注意酶的使用濃度和消化時間。
3. 要注意酶活性的 pH 值,胃蛋白酶在堿性環境中會失去活性,而胰蛋白酶在中性溶劑中活性不佳。
4. 要隨時注意影響酶活性的其他因素,如酶的生產批號等。