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  • 發布時間:2019-08-02 22:39 原文鏈接: 方法二:細菌基因組DNA的微量提取法

    本方法通過SDS裂解細胞,蛋白酶降解蛋白,CTAB去除多糖成分
    一:儀器:同方法一 
    二:試劑:TE、TAE緩沖液;10%SDS;5MNaCL;
    20mg/ml蛋白酶K;CTAB/NaCL溶液(10% CTAB,0.7M NaCL  4.1gNaCL 溶于80ml水中,緩慢加入10gCTAB,加熱溶解);25/24/1,酚/氯仿/異戊醇; 24/1,氯仿/異戊醇;異丙醇;70%及100%乙醇
    三:操作 
    1.5ml  對數生長期細菌細胞
               離心,5000rpm,1min
             
    沉淀
               溶于500μl  TE緩沖液中混勻
               30μl 10%SDS,3μL蛋白酶K,混勻,37℃,1小時
               100μl NaCL(5M)  混勻
               80μl的CTAB/NaCL,*混勻;65℃ 10min(可不做)
               加入等體積酚/氯仿/異戊醇混合液,混勻,
    離心12000rpm,4-5min
            取上清,以下操作與方法一中有機溶劑抽提、沉淀、干燥、除RNA 、復溶等步驟一致。
    注意 1,*此步操作后,離心管中NaCL的濃度不應低于0.5M,否則DNA將與CTAB共沉淀。
      2,本法適用于從多糖含量高的樣品中提取DNA。對于菌體樣品,通過此流程,可以獲得較為完整的DNA分子。

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