以葡萄糖溶液的旋光度測定為例說明旋光度的測試步驟：
1．待測溶液的配制：準確量取0.50g/mL的葡萄糖和果糖樣品10.00mL，定容在100mL容量瓶中配成溶液。
2．旋光儀的零點校正：旋光儀接通電源，鈉光燈發光穩定后（約5min），將裝滿蒸餾水的測定管放入旋光儀中，校正目鏡的焦距，使視野清晰。旋轉手輪，調整檢偏鏡刻度盤，使視場中三分視場的明暗程度一致，讀取刻度盤上所示的刻度值。反復操作兩次，取其平均值作為零點（零點偏差值）。
3．裝待測液：洗凈測定管后，用少量待測液潤洗2-3次，注入待測液，并使管口液面呈凸面。將護片玻璃沿管口邊緣平推蓋好（以免使管內留存氣泡），裝上橡皮填圈，擰緊螺帽至不漏水（太緊會使玻片產生應力，影響測量）。用軟布擦凈測定管，備用（如有氣泡，應趕至管頸突出處）。
4．旋光度的測定：換放盛有待測樣品的測試管，按上述方法測其旋光度值，重復兩次，取其平均值，由葡萄糖溶液的比旋光度計算濃度。
實驗完畢，洗凈測定管，再用蒸餾水洗凈，擦干存放。注意鏡片應用軟絨布揩擦，勿用手觸摸。
注意事項：
1、旋光管中不能有氣泡。
2、旋光管管蓋只要旋至不漏水即可。過緊了，旋鈕會造成損壞，或因玻片受力而致使有一定的假旋光。
3、實驗完畢后，用蒸餾水洗凈旋光管，并擦干外壁，以防止金屬部件被腐蝕 。