無去垢劑的非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳實驗

丙烯酰胺雙丙烯酰胺Tris 堿蔗糖HCl過硫酸按NNN'N'-四甲基乙二胺上槽緩沖液下槽緩沖液樣品緩沖液

平板凝膠電泳裝置電源考馬斯亮藍染料

材料與設備

丙烯酰胺

雙丙烯酰胺

Tris 堿

蔗糖

HCl(1mol/L)

過硫酸按（0.3 g/ml)

N,N,N'，N'-四甲基乙二胺 (TEMED)

平板凝膠電泳裝置

電源（250V)

考馬斯亮藍染料

試劑

上槽緩沖液

下槽緩沖液

樣品緩沖液（5x)

(配方，見「試劑的配制」，PP.82~83)

操作程序

1) 將下列成分溶解于 H₂0 中并調節體積至 47.9 ml

丙烯酰胺                                                     6.0 g

雙丙烯酰胺                                                 0.144 g

Tris 堿                                                         2.18 g

蔗糖                                                            4.80 g

HCl( 1mol/L)                                                2.88 ml

2) 溶液置于具側管的燒瓶中真空脫氣。

3) 加 100ul 0.3 g/ml 過硫酸銨，緩緩旋動使之旋入溶液中。

4) 加 5ul TEMED, 迅速混勻后，將凝膠溶液注入玻板之間。

5) 輕輕叩擊玻板，釋出所有氣泡，插入梳子，用水覆蓋凝膠至凝結。

6) 將凝膠置于電泳裝置中。將上槽緩沖液和下槽緩沖液倒入相應的槽中。

7) 將樣品以 4:1 與 5X 樣品緩沖液 (如,80ul 樣品+20ul 5x 樣品緩沖液) 混合。

8) 小心地拔出梳子，加樣于凝膠孔中，200V 恒壓下電泳。

9) 按 Laemmli 凝膠那樣，用考馬斯亮藍染色（見附錄 5)。