無需新gRNA質粒的CRISPR／Cas9高效基因組編輯技術：CAGO

　　CRISPR/Cas9作為一項革命性的基因組編輯技術已廣泛應用于多種生物的基因組編輯，該技術在具體應用中存在一些問題，例如在基因組中存在的“PAM-free”和“CRISPR-tolerant”等區域無法使用傳統的CRISPR/Cas9技術進行編輯；基因組中每個位點的編輯都需要構建特定的gRNA；脫靶現象也是CRISPR/Cas9技術亟須解決的問題。

　　為解決以上問題，中國科學院天津工業生物技術研究所研究員畢昌昊帶領的微生物合成生物技術研究團隊，與研究員張學禮帶領的微生物代謝工程研究團隊，成功構建了無需新gRNA質粒的CRISPR/Cas9高效基因組編輯技術（CAGO）。

　　首先，將一個含有特殊“N20PAM”序列的編輯片段通過同源重組的方式整合到基因組上，再利用CRISPR/Cas9與red同源重組技術，在插入位點實現基因組內部同源重組，從而實現基因組無痕編輯。該方法可以在基因組任意位點實現非脫靶編輯，編輯過程僅需要合成一個編輯片段，在通用的pCAGO質粒的幫助下便可完成編輯，無需構建gRNA質粒。該方法的構建為合成生物學研究提供了簡單易行的新技術手段，降低了CRISPR/Cas9技術的使用門檻。

　　研究工作獲得國家高技術研究發展計劃（863計劃）和天津市重點專項的支持，相關成果發表在Scientific Reports上。