顯微技術（圖）

顯微鏡是觀察細胞的主要工具。根據光源不同，可分為光學顯微鏡和電子顯微鏡兩大類。前者以可見光（紫外線顯微鏡以紫外光）為光源，后者則以電子束為光源。

—、光學顯微鏡

（一）、普通光學顯微鏡

普通生物顯微鏡由3部分構成，即：①照明系統，包括光源和聚光器；②光學放大系統，由物鏡和目鏡組成，是顯微鏡的主體，為了消除球差和色差，目鏡和物鏡都由復雜的透鏡組構成；③機械裝置，用于固定材料和觀察方便（圖2-1）。

圖2-1 尼康E-600顯微鏡

顯微鏡物象是否清楚不僅決定于放大倍數，還與顯微鏡的分辨力（resolution）有關，分辨力是指顯微鏡（或人的眼睛距目標25cm處）能分辨物體最小間隔的能力，分辨力的大小決定于光的波長和鏡口率以及介質的折射率，用公式表示為：

式中：n=介質折射率；α=鏡口角（標本對物鏡鏡口的張角），N.A.=鏡口率（numeric aperture）。鏡口角總是要小于180?，所以sina/2的最大值必然小于1。

制作光學鏡頭所用的玻璃折射率為1.65～1.78，所用介質的折射率越接近玻璃的越好。對于干燥物鏡來說，介質為空氣，鏡口率一般為0.05～0.95；油鏡頭用香柏油為介質，鏡口率可接近1.5。

普通光線的波長為400～700nm，因此顯微鏡分辨力數值不會小于0.2μm，人眼的分辨力是0.2mm，所以一般顯微鏡設計的最大放大倍數通常為1000X。

（二）、熒光顯微鏡

圖2-2 尼康E800熒光DIC顯微鏡

細胞中有些物質，如葉綠素等，受紫外線照射后可發熒光；另有一些物質本身雖不能發熒光，但如果用熒光染料或熒光抗體染色后，經紫外線照射亦可發熒光，熒光顯微鏡（圖2-2，3，4）就是對這類物質進行定性和定量研究的工具之一。

圖2-3 落射式照明原理