鹽酸克倫特羅是一種β-興奮劑,20世紀80年代初,美國一家公司開始將其添加到飼料中,增加瘦肉率,但如果作為飼料添加劑,使用劑量是人用藥劑量的10倍以上,才能達到提高瘦肉率的效果。它用量大、使用的時間長、代謝慢,所以在屠宰前到上市,在豬體內的殘留量都很大。這個殘留量通過食物進入人體,就使人體漸漸地中毒,積蓄中毒。如果一次攝入量過大,就會產生異常生理反應的中毒現象,因此而被禁用。國內養豬戶不顧農業部的規定,為了使豬肉不長肥膘,在飼料中摻入瘦肉精。豬食用后在代謝過程中促進蛋白質合成,加速脂肪的轉化和分解,提高了豬肉的瘦肉率,因此稱為瘦肉精。
自瘦肉精事件發生以來,月旭公司一直密切關注此事,迅速推出了動物組織中鹽酸克倫特羅(瘦肉精)檢測的全套解決方案。
具體測定方法如下:
1. 適用范圍
適用于動物肌肉和肝臟中鹽酸克倫特羅藥物的檢測。
2. 提取
將5g動物組織、15 mL乙酸乙酯、3 mL10%碳酸鈉溶液置于50 mL離心管中,10000 rpm均質2 min。6000 rpm下離心2 min,將上清液轉至另一離心管中。用15 mL乙酸乙酯重復提取一次,合并提取液。
向乙酸乙酯提取液中加入5 mL 0.1 mol/L的鹽酸溶液,渦動1 min,然后再6000 rpm下離心1 min,收集下層水相。重復萃取一次,合并下層水相,用2.5 mol/L NaOH溶液調節pH至5.2,待凈化。
3. 凈化
活化/平衡:依次向Welchrom? P-SCX(60mg/3mL)中加入3 mL甲醇、3 mL水和3 mL 30 mmol/L鹽酸溶液,流出液棄去;
上樣:將上述提取液加入柱中,流出液棄去;
淋洗:依次用3 mL水、3 mL甲醇淋洗,淋洗液棄去,并將小柱抽干;
洗脫:用2×2 mL 5% 氨化甲醇洗脫,收集洗脫液,40℃下氮氣吹干;
4. 檢測
50% 甲醇溶解殘渣,渦動振蕩1 min,過0.22μm濾膜,裝入進樣小瓶,進樣10μL分析。
色譜條件:
色譜柱: Ultimate XB-C18 液相色譜柱(4.6 mm x 150 mm, 3 μm)
流動相: 0.01 M磷酸緩沖液:甲醇=65:35
流速: 0.7 mL/min
進樣量: 20 μL
柱溫: 30 °C
檢測波長: 244 nm
運行時間:11 min
5. 結果
回收率和重現性實驗
將豬肝空白樣品經過液液萃取初步處理后,分別添加一定量的標準溶液,添加濃度分別為0.5μg/kg、1μg/kg、5μg/ kg、每批次內同一濃度做3次平行實驗,共3個批次(樣品典型回收率色譜圖見附圖)。
豬肝臟中添加0.5 μg/ kg 鹽酸克倫特羅的樣品圖譜
本方法中使用到得耗材:
1. 固相萃取小柱 Welchrom P-SCX 60mg/3mL (P/N:WSP020306)
2. 色譜柱:Ultimate XB-18,50*2.1mm,3μm(P/N:Ult3B18205)
3. 13mm,孔徑0.22μm尼龍針孔濾膜(P/N: WEL-SFNY213022)
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