有機溶劑沉淀法
| 實驗方法原理 |
將有機溶液例如丙酮和乙醇加入蛋白質溶液時，和高濃度鹽類似產生沉淀，這是因為它們能夠降低蛋白質的溶解度。在溫度為 10 ℃ 左右時蛋白質在有機溶劑中容易變性，所以在沉淀時必須特別注意冷卻溶液和離心轉頭（0 ℃～4 ℃ 為佳），建議離子強度為 0.05～0.2 mol/L。 有機溶劑的濃度按體積百分數計算，累加體積并不精確。例如用簡便的方法將 100 ml 水溶液要配制成 50％（v/v 乙醇溶液，就是向 100 ml 水溶液中加 100 ml 的乙醇溶液。盡管最后總體積是 192 ml。大多數蛋白質的分子量大于 15 kl），—般用 50％ 有機溶別迸行沉淀。 |
|---|---|
| 實驗材料 | 蛋白質溶液 |
| 試劑、試劑盒 | 丙酮或乙醇 再懸浮沉淀的緩沖液 |
| 儀器、耗材 | 燒杯 磁力攪拌器和攪拌子 離心機和轉頭 |
| 實驗步驟 |
1. 在 4℃ 下，向 100 ml 蛋白質溶液中，緩緩加入 100 ml 丙酮， 或乙醇（冷卻至 -20℃），在冰浴上持續溫和地攪拌； 2. 在冰上持續攬拌 10～15 min； 3. 低溫離心 10 000×g 10 min； 4. 除去上清液； 5. 用沉淀的 2 倍體積的冷緩沖液冉使沉淀懸浮。實際上變性蛋白質難于溶解，可用過濾或離心的方法除去。
展開 |
| 注意事項 |
1. 酸性蛋白質在二價陽離子例如 Mg2＋ 存在下，以復合物的形式較易被沉淀。 2. 大分子的蛋白質及親水的蛋白往往在較低濃度的有機溶劑中就能析出。 3. 在溶液 pH 值接近蛋白質的等電點時，蛋白質在有機溶液中的溶解度降低。 |