⑦Dot-ELISA試驗
免疫斑點試驗（Dot-ELISA）是以硝酸纖維素膜或醋酸纖維素膜為固相載體，進行抗原抗體反應的免疫檢測手段。該法采用不溶性底物（如DAB，或4-氯萘酚或AgNO3等），其與相應標記物（HRP、AP、膠體金）作用形成不溶性產物，呈現斑點狀著色，從而易于判定結果。根據所用的標記物不同，可分為HRP
免疫斑點試驗、AP免疫斑點試驗和免疫金銀斑點法等。其操作步驟大致如下：
a、將抗原液2-5ul點加于纖維素膜上，室溫37℃干燥。
b、將纖維膜浸入封閉液中，37℃ 30分鐘。
c、用洗滌液洗2次，吸干后加待檢McAb樣品，37℃ 1小時；用洗滌液振蕩洗滌三次，每次5分鐘，加HRP或AP或膠體金標記的抗鼠Ig抗體，37℃作用30分鐘。
d、同法洗滌，吸干，用新配的相應底物溶液顯色，然后水洗終止反應，觀察結果。
⑧免疫組化染色法
該法主要用于檢測針對細胞抗原成分的McAb，常用的方法是間接免疫過氧化物酶試驗（IIP，indirect immunoperoxidase）及APAAP技術。其結果用光鏡或倒置顯微鏡檢查。
（2）免疫熒光技術
免疫熒光技術可用于多種抗原的雜交瘤抗體檢測，如細胞性抗原（包括細菌和動物細胞）、感染細胞中的病毒抗原和膜抗原等。其操作簡單、敏感性高，可直接觀察抗原定位等優點，在McAb的篩選與鑒定上具有重要的應用價值。
①器材和試劑
a、供檢測抗體用的抗原制備?固定細胞片或板，活細胞懸液。
b、PBS（PH7.2，0.01mol/L）
c、待檢的McAb樣品。
d、冷丙酮
e、FITC（異硫氰酸熒光素）或TRITC（四甲基異硫氰酸羅丹明熒光素）標記的抗鼠Ig抗體等
f、熒光顯微鏡，磁力攪拌器，離心機，水浴箱等。
②間接免疫熒光法
a、固定細胞片的制備：生長在蓋片上的細胞（接種或未接種病毒），可直接收獲蓋片，在PBS中洗滌，用4℃丙酮固定10分鐘，空氣干燥，置密封容器于-20℃保存備用；單細胞懸液可在蓋片上制成涂片，固定方法同上。
細胞涂片的制備：將10ul細菌懸液（1×108個/ml）涂抹7×21mm蓋片上，自然干燥后，用-20℃丙酮固定10-15分鐘，于-20℃保存備用。
b、蓋片在去離子水中濕潤后置架上滴加10-20ul雜交瘤上清或其他待檢樣品；設立陽性、陰性對照；置37℃水浴孵育0.5-1小時。
c、取出蓋片置PBS中用磁力攪拌器洗滌15分鐘。
d、蓋片置架上，滴加工作濃度的抗鼠Ig的熒光抗體10-20ul，37℃孵育0.5-1小時。
e、同法洗滌15分鐘；取出蓋片，用延緩熒光碎滅的封載劑（如緩沖甘油，9份甘油加1份PBS）封于干凈載玻片上。
f、光顯微鏡上觀察，陽性結果可見特異性熒光（FITC為黃綠色熒光，TRITC為桔紅色熒光）。
g、細胞固定片的制備，也可改在培養板孔中進行，其余步驟同上，在觀察結果時，將培養板翻轉置于熒光顯微鏡下，判斷標準不變。
③細胞的膜熒光染色
完整的活細胞的細胞膜，抗體不能透過。如果細胞在4℃操作，則熒光染色僅限于細胞膜。必須注意死細胞常以非特異性方式吸附大量熒光抗體，因此試驗過程中要保證細胞的高活力。活細胞的膜熒光染色大致步驟如下：
a、制備活性較好的細胞懸液，調節濃度至107個/ml。
b、在小試管（5×50mm）中加入100ul細胞懸液，再加入100ul待檢McAb的樣品，混勻，4℃作用30-90分鐘。
c、用洗滌液（PBS 900ml，小牛血清50ml，4%NaN3 50ml）洗二次，每次加洗滌液1-5ml，1000r/min離心5分鐘，棄上清。加入100ul熒光抗體，4℃作用30-90分鐘。
d、同法洗滌，將細胞重新懸于20-30ul含10%甘油和10-100ug苯二胺/ml的溶液中；滴加于載玻片上，加蓋片封載。
e、立即在熒光顯微鏡上檢查。
f、細胞也可在染色后用1%多聚甲醛生理鹽水固定，立即檢查，或至少在4℃可保存一周