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  • 發布時間:2022-10-30 12:54 原文鏈接: 桿狀病毒表達系統用于表達多個非融合蛋白的轉染載體

      這種載體的主要特征是含有2個或2個以上相同的啟動子,可表達2條或2條以上多肽鏈的蛋白。

      如Emery和Bishop[8]等構建的pAcVC2轉染質粒,含有兩個方向相反的多角體基因啟動子。重組病毒可同時表達多角體蛋白和淋巴細胞性脈絡叢腦膜炎病毒(LCMV) N蛋白。Takehara[9]等構建了可插入兩種外源基因的雙重表達載體。該類載體也是利用兩個相同的多角體基因啟動子,使獲得的重組病毒同時表達兩種產物。Takehara等因此成功地表達了HBVsAg和HBeAg。

      利用重組轉染載體與野生型AcNPV DNA共轉染細胞后獲得重組病毒的頻率是非常低的,通常只有0.2%~

      5%[10]。這樣就為篩選重組病毒的工作困難,為了提高重組效率,研究者們進行了一些探索:

      (1)線性化AcNPV DNA:Kitts等[11]首先提出了將AcNPV DNA進行線性化處理。因為線性化的AcNPV DNA感染宿主細胞的能力很低,當與重組轉移質粒發生同源重組后,原來線狀的 AcNPV DNA即可自身環化,感染細胞的能力恢復,因此感染昆蟲細胞的病毒絕大多數為重組病毒,這樣使重組頻率可提高到30%;

      (2)致死缺陷型病毒:由Pharmingen公司[10]推出的BaculoGoldTM系統就是一個含致死缺陷型的線性AcNPV DNA。這種系統的DNA在多角體蛋白基因下游1.7 kb范圍內的一段復制必需基因被去除,致使這種DNA轉染包裝細胞后不能復制成成熟的病毒粒子。當把重組轉染質粒與其轉染昆蟲細胞后,外源基因修復了缺失部分,病毒被復活可形成具有感染能力的病毒體,再感染其它的昆蟲細胞。這種DNA與轉染質粒的重組效率可提高到85%~99%。

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