極譜法快速測定食品中的合成著色劑

1、方法原理  

食品中的合成著色劑,在特定的緩沖溶液中,在滴汞電極上可產生敏感的極譜波,波高與著色劑的濃度成正比。當食品中存在一種或兩種以上互不影響測定的著色劑時,可與標準系列進行比較定性、定量。現代化的微機極譜儀,操作比較簡單,結果準確,分析速度快。

2、儀器  

微機極譜儀。

3、試劑
(1)底液 A:磷酸鹽緩沖液(可用于紅色和黃色復合色素),可作菜紅、胭脂紅、日落黃、檸檬黃以及靛藍著色劑的測定底液。稱取13.6g 無水磷酸二氫鉀(KH₂PO₄)和14.1g 無水磷酸氫二鈉(Na₂HPO₄)[或35.6g 含結晶水的磷酸氫二鈉(Na₂HPO₄·12H₂O)]及10.0g 氯化鈉,加水溶解后稀釋至1L。

(2)底液 B:乙酸鹽緩沖液(可用于綠色和藍色復合色素),可作靛藍、亮藍、檸檬黃、日落黃著色劑的測定底液。量取40.0m 冰乙酸,加水約400mL,加入20.0g 無水乙酸鈉,溶解后加水稀釋至1L。

(3)1.00mg/mL 著色劑標準溶液和10.0μg/mL 著色劑標準使用溶液。

4、樣品處理
(1)飲料和酒類  取樣10.0～25.0mL 加熱驅除 CO₂ 和乙醇,冷卻后用200g/L NaOH 和 HCl(1+1)校至中性,然后加蒸餾水至原體積。

(2)表層色素類  取樣5.0～10.0g,用蒸餾水反復漂洗直至色素完全被洗脫。合并洗脫液并定容至一定體積。

(3)水果糖和果凍類  取樣5.0g,用水加熱溶解,冷卻后定容至25.0mL。

5、測定
(1)極譜條件  滴汞電極,一階導數,三電極制,掃描速度250mV/s,底液 A 的初始掃描電位-0.2V,終止掃描電位-0.9V,參考峰電位為莧菜紅-0.42V、日落黃-0.50V、檸檬黃-0.56V、胭脂紅-0.69V、靛藍-0.29V。底液B的初始掃描電位0.0V,終止掃描電位-1.0V,參考峰電位(溶液、底液偏酸使出峰電位正移,偏堿使出峰電位負移)為靛藍-0.16V、日落黃-0.32V、檸檬黃-0.45V、亮藍-0.80V。

(2)標準曲線制作  吸取著色劑標準使用溶液0,0.50mL,1.00mL,2.00mL,3.00mL,4.00mL 分別于10mL 比色管中,加入5.00mL 底液,用水定容至10.0mL(濃度分別為0,0.50μg/mL,1.00μg/mL,2.0μg/mL,3.00g/mL,4.00g/mL,0為試劑空白溶液)。混勻后于極譜儀上測定。

(3)樣品測定  取樣品處理液1.00mL,或一定量(復合色素峰電位較近時,盡量取稀溶液),加底液5.00mL,加水至10.00mL,搖勻后與標準系列溶液同時測定。記錄樣品峰高,用標準曲線法計算樣品中著色劑的含量。

6、注釋
(1)方法檢出限與線性范圍  合成著色劑的檢出限一般可達到0.2μg/mL。標準曲線建立在0.20～5.00μg/mL 范圍內,線性關系良好,r值一般可達到0.999。

(2)方法穩定性  將標準使用液和樣品測定液室溫放置30h(>30h未作),在汞瓶高度不變的情況下,其峰電位與峰高基本不變。底液室溫放置6個月,磷酸鹽底液中會出現少許絮狀物,但對測定無影響。

(3)混合著色劑的極譜圖  取磷酸鹽底液或乙酸鹽底液5mL,置10mL 比色管中,用微量注射器注入多種著色劑,用水稀釋到10mL,使各著色劑的含量為0.50μg/mL,1.00μg/mL,2.00μg/mL,3.00ug/mL,在極譜儀上測定后由微機自動做出極譜圖,見下面兩圖。磷酸鹽底液適合于紅色和黃色復合色素,可作莧菜紅、胭脂紅、日落黃、檸檬黃以及靛藍著色劑的測定底液。乙酸鹽底液適合于綠色和藍色復合色素,可作靛藍、亮藍、檸檬黃、日落黃著色劑的測定底液。當測定一個未知著色劑的樣品時,可采用圖譜掃描的方式進行定性。

(4)著色劑間的影響  單一著色劑或兩種以上的著色劑其出峰電位相隔較遠時,定量很容易進行。當復合著色劑兩個峰電位相隔較近時,將會對定量產生影響,減少取樣量或較稀的溶液可使影響降低。

(5)極譜法測定食品中合成著色劑的選擇性  極譜法測定食品中合成著色劑,方法簡單,操作容易,結果出示快,尤其適合于樣品中為單一色素及峰電位相隔較遠的混合色素的測定。當測定峰電位相隔較近的混合色素時,需要摸索二者的影響程度,選擇恰當的取樣量或樣品稀釋程度。