染色體的標本制作及其組型實驗2

3.3.5. 磷酸緩沖液:
1/15 mol/L Na2HPO4?12H2O: 2.39g 溶于100ml雙蒸水中。
1/15 mol/L KH2PO4 0.907g 溶于100ml雙蒸水中。
取1/15 mol/L Na2HPO4?12H2O液80ml、1/15 mol/L KH2PO4液 20ml混合即為pH=7.38之磷酸緩沖液。
如用無水Na2HPO4配制磷酸緩沖液，還可用以下方法配制；
A液:
Na2HPO4 9.47g
雙蒸水 1000ml
B液:
KH2PO4 9.06g
雙蒸水 1000ml
根據下表中所示比例即可配制出不同pH值的磷酸緩沖液。
表1 磷酸緩沖液配制比例
pH值 A液(ml) B液(ml)
5.8 7.8 92.2
6.0 12.0 88.0
6.4 26.5 73.5
6.6 37.5 62.5
6.8 50.0 50.0
7.0 61.1 38.9
7.2 71.5 28.5
7.4 80.4 19.6
3.3.6. 0.3% KCl水溶液（低滲液）。
4.實 驗 方 法
4.1 染色體標本的制做
取小白鼠注射秋水仙素
↓14~16h后
斷頭法殺死，取睪丸洗凈血污
↓
移入KCl的低滲溶液內將睪丸剪碎(呈乳白色)
↓銅網過濾至刻度離心管中
加入KCl低滲溶液于37℃水浴中低滲處理 30min（使細胞膨脹）
↓
800~1000r/min離心8min
↓輕輕地去除上清液
加入新配制的 Carnoy’s固定液，立即用吸管輕輕將細胞吹散
↓
室溫固定8min
↓
800~1000r/min離心 8min
↓棄去上清液
加入新制Carnoy’s固定液，用滴管輕輕將細胞吹散，制成細胞懸液
↓
取出預冷的干凈載玻片，以10~15cm高度滴加細胞懸液（細胞脹破）
↓
立即吹打載玻片
↓
多余的水分吸去后用文火烤干或空氣干燥
↓
稀釋Giemsa原液
Giemsa染色（倒置染色法，后有說明）30min
↓
用流水沖洗標本載玻片
↓
文火烤干顯微觀察
↓
選擇染色好的分裂相染色體封片后油鏡下進行顯微照相
[附]：倒置染色法――在玻璃板上用廢舊載玻片作支架, 使標本載玻片的標本面向下放置到支架上, 在玻璃板和標本載玻片之間滴加Giemsa染液，目的一可以節省染料，二可以避免染液快速揮發，三可以防止染色顆粒沉淀，影響觀察。在操作時應注意，多個樣品同時染色應擺放緊密，不要有間隙；滴染液時應盡量慢，不要有氣泡，以免部分染色體不被著色。