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  • 發布時間:2019-04-28 18:06 原文鏈接: 染色體G帶技術

    也稱為G顯帶,是最常用的顯帶方法,具有操作簡便、經濟及標本能長期保存等優點。
    1、Giemsa原液的配制:
      (1)稱3.75gGiemsa粉置研磨器中,加少許丙三醇研磨,研磨越細越好;
      (2)將研細的Giemsa加丙三醇移入500ml棕色瓶內,丙三醇的總量為250ml,用一定量甲醇洗干凈研磨器。
      (3)搖勻,置60℃水浴鍋24小時或37℃溫箱72小時,經常搖動。
      (4)取出冷卻后,加甲醇總量至250ml混勻,密封棕色瓶備用。貯藏時間越長,染色效果越好。
    2、實驗材料:
      中期染色體標本;
      0.9%氯化鈉注射水;
      3%tris液體;
      0.25%胰蛋白酶;
      Gremsa染色液;
      蒸餾水;
      水浴鍋;
      立式染缸;
      定時器或時針;
      溫度計;
      鑷子及紗布;
      刻字筆;
    3、操作程序:
      (1)消化液配制:取0.9%氯化鈉注射水100ml,加0.25%胰蛋白酶1ml,制成0.025%胰蛋白酶鹽水消化液,加4-5滴tris液調PH6.8左右,移消化液于立式染色缸并置37℃水浴鍋中備用;
      (2)染液配制:取立式染缸,加蒸餾水500ml,加3滴tris液調PH并加入Giemea染液1ml左右,用吸管調勻備用; 
      (3)漂洗液:取立式染缸一個,內加蒸餾水備用;
      (4)試消化:待消化液溫度在37℃左右時,取同批標本較多者標本1張,分二節或三節進行消化,每節相差十五秒左右,從45秒或60秒開始增減。取出后先在紗布或吸水紙上直立除去帶出胰蛋白酶,后置蒸餾水染缸內漂洗,取出后,標本斜面朝上,刮去染色缸內染液上浮膜,沿槽插入,每分鐘移動1次,染色3-5分鐘。
      (5)洗片:從染色缸中取出標本玻片,自來水沖洗,取刻編號面朝上用紗布干凈玻片背部染色,稍干,高倍鏡下觀片,確定分帶與染色時間。
      (6)分帶:取4張待分帶標本玻片,細胞面朝左側按順序插入37℃的消化液中,消化時間較試消化選擇時間延長5-10秒鐘,取出每片間隔時間約10秒鐘左右。
      (7)消化及染色調整:每次消化完一批標本后,需加入配好的消化液25ml于消化缸中,下次消化時間不變。同樣,每次染色一批標本后加Giemsa染色液2-3滴,調勻,每次染色時間不變;
      (8)Giemsa染色調整:若Giemsa染色標本偏紅,說明染色液偏酸,可加tris數滴調藍,若Gremsa染色標本偏藍則說明tris加多了;
      (9)保存:將分好帶的及觀察中的標本及時收集于玻片盒內保存,防止細胞涂面灰塵污染及擦損。
      注意:Giemsa消化染色過程中,有兩個重要的環節,一是胰酶消化環節,消化不足帶不出現,消化過度染色體變得膨脹和不著色,必須把握好胰酶濃度、消化時間和消化溫度;二是預處理或老化環節,對消化和帶型清晰度有很大影響,其中80℃2小時熱處理,是簡便易行和效果較好的辦法。

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