一、標準曲線
一般用分光光度法測物質的含量，先要制作標準曲線，然后根據標準曲線查出所測物質的含量。因此，制作標準曲線是生物檢測分析的一項基本技術。
二、蛋白質含量測定方法
1、凱氏定氮法
2、雙縮脲法
3、Folin-酚試劑法
4、紫外吸收法
5、考馬斯亮藍法
三、考馬斯亮藍法測定蛋白質含量—標準曲線制作
（一）、試劑：
1、考馬斯亮藍試劑：
考馬斯亮藍G—250 100mg溶于50ml 95%乙醇，加入100ml 85% H3PO4，雍蒸餾水稀釋至1000ml,濾紙過濾。最終試劑中含0.01%（W/V）考馬斯亮藍G—250,4.7%（W/V）乙醇，8.5%（W/V）H3PO4。
2、標準蛋白質溶液：
純的牛血清血蛋白，預先經微量凱氏定氮法測定蛋白氮含量，根據其純度同0.15mol/LNaCl配制成100ug/ml蛋白溶液。
（二）、器材：
1、722S型分光光度計使用及原理。
2、移液管使用。
（三）、標準曲線制作：
1、
| 試管編號 | 0 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
| 100ug/ml標準蛋白（ml） | 0.0 | 0.1 | 0.2 | 0.3 | 0.4 | 0.5 | 0.6 |
| 0.15mol/L NaCl （ml） | 1 | 0.9 | 0.8 | 0.7 | 0.6 | 0.5 | 0.4 |
| 考馬斯亮藍試劑 （ml） | 5 | 5 | 5 | 5 | 5 | 5 | 5 |
| 搖勻，1h內以1號管為空白對照,在595nm處比色 | |||||||
| A595nm |
2、以A595nm為縱坐標，標準蛋白含量為橫坐標（六個點為10ug、20 ug、30 ug、40 ug、50 ug、60 ug），在坐標軸上繪制標準曲線。
1）、利用標準曲線查出回歸方程。
2）、用公式計算回歸方程。
3）、或用origin作圖 ，測出回歸線性方程。即A595nm=a×X( )+6
一般相關系數應過0.999以上，至少2個9以上。
4）、繪圖時近兩使點在一條直線上，在直線上的點應該在直線兩側。
（四）、蛋白質含量的測定：
樣品即所測蛋白質含量樣品（含量應處理在所測范圍內），依照操作步驟1操作，測出樣品的A595nm，然后利用標準曲線或回歸方程求出樣品蛋白質含量。
一般被測樣品的A595nm值在0.1—0.05之間，所以上述樣品如果A595nm值太大，可以稀釋后再測A595nm值，然后再計算。
（五）、注意事項：
1、玻璃儀器要洗滌干凈。
2、取量要準確。
3、玻璃儀器要干燥，避免溫度變化。
4、對照：用被測物質以外的物質作空白對照。
藥品的配制（磷酸緩沖液的配制）
一、藥品的配制步驟
（一）、實驗準備：
1、準備所需的藥品和玻璃儀器。
2、 洗滌。（怎樣洗滌算干凈？）
（二）、計算：
1、百分比濃度計算：
1)、G/V比
例如配1% NaCl，稱1g NaCl溶于100ml 水。
2）、V/V比：
例如配75%乙醇100ml，75%×100%=100%×X, X=75ml。取75ml無水乙醇，加25ml蒸餾水。
乙醇：乙醚：丙酮=2：1：2配500ml，各取200 ml，100 ml，200 ml混合。
3）G/V比：用的較少，如計算灰分中某種元素如Fe的含量。
2、摩爾濃度計算：注：藥品的分子量一般在標簽中注明。
1）、0.1M或0.1mol/L NaCl配100ml。
M=質量/體積（L）稱取NaCl0.1×0.1×40=0.4g 摩爾數=G（g）/摩爾質量
2）、0.1mMNaCl配100ml
mM=毫摩爾數/體積（L） 稱取NaCl0.1×0.1×40=0.4g
毫摩爾數=G（mg）/摩爾質量
3）、0.1uNaCl配100ml
mM=微摩爾數/體積（L） 稱取NaCl0.1×0.1×40=0.4mg
微摩爾數=G（ug）/摩爾質量 稱取NaCl0.1×0.1×40=0.4ug
3、混合溶液配制的計算：
如配3uMEDTA，2.25mM NBT以及60uM 溶液100ml，用50mM磷酸緩沖液配制。
注意：1、分別標定體積計算
2、分別配制再混合，但總體積不能 為100ml
（三）、標量：
1、根據需要選擇不同量程的天平根據要求去不同精度的測量器，如量筒或移液管。
2、電子分析天平的使用。
（四）、溶解：
1、根據藥品配置要求選擇溶劑。蒸餾水，雙蒸水，無離子水等。
2、只能用燒杯溶解。注意加入溶劑只能加入總體積的2/3左右，剩余溶劑洗滌燒杯三次左右，直到洗滌干凈。
小常識：藥品標簽中一般標識有藥品的溶解性能和分子式，可根據分子式和所學的常識判斷藥品的結構和性質特點（包括溶解性質）。
如酸堿兩性物質的配制（AA、蛋白質、核苷酸等）如果溶解性能不好可以用稀酸或稀堿促進溶解，但pH應在被要求的范圍內。
3、加熱促進溶解，但注意應在配制的范圍內有的藥品還需水溶加熱較好。如:配0.1%的淀粉，水裕加熱（溫度在80-90。C），過量會糊化。
（五）、定容：
1、用容量瓶定容；
2、用玻璃棒引流或用小漏斗；
3、用溶劑加入到接近刻度，然后用滴管加入到刻度。要求刻度與液體凹面相切為止（眼睛可視）；
4、上下窯洞容量瓶幾次，混合均勻即可。(注意不再定容了，防止溶液漏掉。)
（六）、裝入試劑瓶，貼上標簽。
標簽應注明以下內容：藥品濃度、名稱、配制人、配制日期等。
（七）、清理實驗場所。
二、磷酸緩沖液的配制。
（一）、配制0.2mol/L即0.2M pH=6.8的磷酸緩沖液。用磷酸氫二鈉—磷酸二氫鈉做緩沖液。
選用藥品：Na2HPO4·12H2O（堿）和NaH2PO4·12H2O（酸）配緩沖液100ml。書中說明。
（二）、計算 ：
1、注：書中有注明配置的量。
2、計算：Na2HPO4·12H2O稱取71.64×0.1=7.164g
NaH2PO4·12H2O稱取 31.21×0.1=3.121g
3、含有不同結晶水的換算。
書中配1/15mol/L的緩沖液配1L，書中用Na2HPO4·2H2O需要11.87g/L但用Na2HPO4·12H2O需多少g？
11.87=（178/358）×X，X=23.87g。
（三）、分別配制緩沖液各100ml（根據需要確定配制的量）。
即：0.2M Na2HPO4·2H2O和NaH2PO4·2H2O100ml。
（四）、按書中的量配制取量再混合。
如：pH=6.8，分別去緩沖對49ml和51ml。
（五）、用pH試紙ceni索賠的緩沖液的pH值，檢測配置是否準確。
（六）如配50mM pH =6.8的緩沖液100ml ，以你配制的母液稀釋即可。
計算：50×0.1=0.2×1000×X （L）；X =0.025L；
取0.2M pH=7.2的緩沖液25ml，用蒸餾水定容至100ml即可。