核酸親和柱的應用極大地促進了核酸結合調節蛋白特性的研究，這些蛋白質涉及基因表達、染色體修復和復制、基因重組等的調控。核酸結合蛋白可以結合單鏈 DNA、雙鏈 DNA 或 RNA。DNA 結合蛋白結合 DNA 可以是序列特異的，也可以是非特異的。此外，含有特異寡核苷酸的親和樹脂能用于某些酶的分離，這些酶利用結構非常相似的輔酶，如 NAD 和 NADP。總之，核酸親和柱在各種蛋白質的純化和特性研究中是一個有用的工具。
步驟一 偶聯寡核苷酸到溴化氰活化的 Sepharose 4B
| 實驗方法原理 | DNA 偶聯至溴化氰活化的 Sepharcse 4B 是通過它們本身的堿基實現的。從理論上講，該方法也許干擾最佳結合序列的接近路徑，但是這樣一個簡單的方法一直被廣泛地成功應用。偶聯效率的定量檢測可經 A260 值測定評估，或者更精確地從偶聯介質上水解核酸和進行磷酸鹽測定。 |
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| 實驗材料 | 寡核苷酸 |
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| 試劑、試劑盒 | HClKCl乙醇胺-鹽酸磷酸鉀緩沖液儲存緩沖液 |
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| 儀器、耗材 | 燒結玻璃漏斗聚丙烯試管 |
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| 實驗步驟 |
1. 混懸 1.5 g CNBr-Sepharose 4B 在水中，室溫靜置 30 min 約可獲得 5 ml 溶脹的膠。經燒結玻璃漏斗過濾，當水分濾盡而溶脹的膠仍是潮濕的時候，立即停止抽濾；
2. 膠在漏斗內，依次用 4℃，200 ml mmol/L HCl、200 ml 水和 200 ml 10 mmol/L，pH 8.0 磷酸鉀緩沖液清洗；
3. 將膠移入含 2 ml 10 mmol/L，pH 8.0 磷酸鉀緩沖液的 15 ml 試管內；
4. 加 50 ul 寡核苷酸到試管，約每 ml 膠需用 2nmol 寡核苷酸。室溫下振搖 16 h；
5. 再移入燒結玻璃漏斗，抽濾除去液體；
6. 先后用 200 ml 水和 100 ml 1 mol/L，pH 8.0 乙醇胺-鹽酸清洗；
7. 將膠移入聚丙烯試管，在 7 ml 1 mol/L，pH 8.0 乙醇胺-鹽酸中混懸。室溫下搖 4～6 h。該步驟滅活未偶聯的活化的膠；
8. 在燒結漏斗中，依次用下述溶液洗膠。100 ml 10 mol/L，pH 8.0 磷酸鉀緩沖液；100 ml 1 mol/L，pH 8.0 磷酸鉀緩沖液；100 ml 1 mol/L KCl；100 ml H2O；100 ml 儲存緩沖液（10 mmol/L pH 7.6 Tris-HCl，0.3 mol/L NaCl，1 mmol/L EDTA，0.02％ NaN3；
9. 4℃可儲存一年。 展開 |
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