核酸檢測的物質是病毒的核酸。核酸檢測是查找患者的呼吸道標本、血液或糞便中是否存在外來入侵的病毒的核酸,來確定是否被新冠病毒感染。因此一旦檢測為核酸“陽性”,即可證明患者體內有病毒存在[1]。
新冠病毒感染人體之后,首先會在呼吸道系統中進行繁殖,因此可以通過檢測痰液、鼻咽拭子中的病毒核酸判斷人體是否感染病毒。[2]所以說,核酸檢測陽性可以作為新型冠狀病毒感染確診的金標準。[1]
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核酸檢測法
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新型冠狀病毒核酸檢測原理
新型冠狀病毒的核酸檢測流程
核酸檢測的“假陽性”與“假陰性”
核酸檢測原理
所有生物除朊病毒外都含有核酸,核酸包括脫氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA),新型冠狀病毒是一種僅含有RNA的病毒,病毒中特異性RNA序列是區分該病毒與其它病原體的標志物。新型冠狀病毒出現后,我國科學家在極短的時間里完成了對新型冠狀病毒全基因組序列的解析,并通過與其它物種的基因組序列對比,發現了新型冠狀病毒中的特異核酸序列。臨床實驗室檢測過程中,如果能在患者樣本中檢測到新型冠狀病毒的特異核酸序列,應提示該患者可能被新型冠狀病毒感染。[3]
新型冠狀病毒核酸檢測原理
檢測新型冠狀病毒特異序列的方法最常見的是熒光定量PCR(聚合酶鏈式反應)。因PCR反應模板僅為DNA,因此在進行PCR反應前,應將新型冠狀病毒核酸(RNA)逆轉錄為DNA。在PCR反應體系中,包含一對特異性引物以及一個Taqman探針,該探針為一段特異性寡核苷酸序列,兩端分別標記了報告熒光基團和淬滅熒光基團。探針完整時,報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收;如反應體系存在靶序列,PCR反應時探針與模板結合,DNA聚合酶沿模板利用酶的外切酶活性將探針酶切降解,報告基團與淬滅基團分離,發出熒光。每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子產生。熒光定量PCR儀能夠監測出熒光到達預先設定閾值的循環數(Ct值)與病毒核酸濃度有關,病毒核酸濃度越高, Ct值越小。不同生產企業的產品會依據自身產品的性能確定本產品的陽性判斷值。[3]
新型冠狀病毒的核酸檢測流程
對于新型冠狀病毒的核酸檢測,首先根據試劑盒說明書”樣本要求“部分進行樣本采集,常規的樣本類型包括咽拭子、鼻拭子、痰液、支氣管灌洗液、肺泡灌洗液等。
獲得患者樣本后,需盡快進行檢測,如無法立即檢測需要轉運的樣本,應按照說明書的要求進行低溫封裝,并送到專門的檢測機構進行檢測。檢測機構收到樣本后,對樣本進行核酸提取,核酸提取試劑應使用批準產品說明書中指定的核酸提取試劑盒。
病毒RNA需要首先逆轉錄為cDNA,再進行擴增檢測。PCR擴增和檢測應使用批準產品說明書中指定的熒光定量PCR儀,通過熒光定量PCR所得到的樣本Ct值的大小,可以判斷患者樣本中是否含有新型冠狀病毒。
上述過程中樣本的采集、保存、轉運,樣本核酸的提取和檢測、結果的判讀均須嚴格按照試劑盒說明書要求進行。[3]
核酸檢測的“假陽性”與“假陰性”
核酸檢測的“假陽性”是指患者本來沒感染新冠病毒,但核酸檢測出現陽性結果。此“假陽性”的出現通常是由于實驗室檢測過程中標本間的交叉污染或實驗室核酸污染造成的。在技術層面上講,只要實驗室嚴格落實質控工作,可有效避免“假陽性”的產生。
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