梯度PCR只是方便你尋找最佳PCR退火溫度，可能減少你做PCR的次數和時間。使用時和樓上的兄弟說的一樣，但有一點需要說明一下，就是你所設的溫度梯度并不能象樓上的兄弟所說的那么簡單，設溫度梯度時，第一行的溫度是需要一個簡單計算的。比如一個12X8的96孔板，如果一共可設12個溫度梯度，也就是說每8個孔是一個溫度。你所設的初始溫度是56度，你設的溫度梯度是14，那你每一排的溫度相差就是14/12。以些類推。另外，一個PCR引物和體系設計出來以后，如何確定一個基準的溫度，然后再根據這個溫度上下調整呢？其實一個很實用且簡單的方法就是你將你所設計的引物我PCR產物放到Oligo中去評價，它會給你一個最佳的退火溫度和循環參數，這個溫度實際上就和你通過梯度PCR摸索出來的退火溫度幾乎是一樣的。所以，以我的經驗就直接用軟件給出的退火溫度就沒有問題。